心肌酶譜

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心肌酶檢查,檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死細胞膜通透性。

1.血清酶總論:P232

LDH、AST、CK及其同I酶,α-HBD  

目錄

一、血清酶的來源和分類:

(一)根據來源及血漿中發揮作用:

1.血漿持異酶:主要在血漿中發揮催化作用的酶類

eg:凝血酶原凝血因子(X、ⅫI、Ⅶ)纖溶酶原,前激肽釋放酶

假性膽鹼脂酶:銅藍蛋白脂蛋白脂肪酶腎素

假性膽鹼脂酶:水解可能干擾乙醯膽鹼酶活性的一些化合物

銅藍蛋白:是一種氧化酶,與Fe蛋白,動員有關

脂蛋白脂肪酶:參與脂蛋白中脂肪的水解和儲存

2.外分泌

eg:唾液胰澱粉酶胰脂肪酶胃蛋白酶胰蛋白酶前列腺酸性磷酸酶等。

在血漿中很少發揮催化作用

其濃度與其分泌腺體的功能有關

3.細胞酶:存在於各細胞和組織中進行物質代謝的酶類

血液中無重要的催化作用

(1)一般代謝酶:無器官特異性

(2)組織專一性酶:OCT、SDH、ADH主要存在於肝。其活性能較特異地反映肝cell的病變。

(二)根據酶促反應性質可將酶分為六類:

1.氧化還原酶類:催化底物進行氧化還原反應。eg:LDH

CHO CHO

C=0+NADH+H+ LDH CH-OH+NAD+

COOH COOH

丙酮乳酸

eg:LDH琥珀酸脫氫酶細胞色素氧化酶過氧化物酶

2.轉移酶類:催化底物之間進行某些基團的轉移或交換的酶類

COOH CH3 COOH CH3

(CH2)2 +HC-NH2 ALT (CH2)2 + C=0

C=0 COOH HC-NH2 COOH

COOH COOH

α-酮戊二酸 丙氨酸 谷氨酸 丙酮酸

eg:轉氨酶已糖激酶磷酸化酶

3.水解酶:催化底物之間發生水解反應的酶類

eg:澱粉酶蛋白酶脂肪酶磷酸酶

ALP

對-硝基苯磷酸鹽對-硝基苯酚+磷酸鹽

水解

4.裂解酶類:催化底物移去一個基因而留下雙鍵的反應或逆反應的酶類。

eg:碳酸酐酶醛縮酶

5.異構酶類:催化各種同分異構體之間互相轉化的酶類

eg:磷酸已糖激酶消旋酶

磷酸已糖激酶

6-磷酸葡萄糖6-磷酸果糖

6.合成酶類(連接酶類):催化兩分子底物合成-分子的化合物,同時必須偶聯有ATP磷酸鍵斷裂。  

二、血清酶的命名:

1.習慣命名法:根據酶來源,催化反應性質及底物來命名。

底物:澱粉酶,蛋白酶

性質:脫氫酶、轉移酶

來源:胰澱粉酶、胃蛋白酶

底物+性質:穀草轉氨酶

2.系統命名法:酶反應底物、性質均要列出,各底物間以「:」隔開

編號:(1)1為氧化還原酶類

2為轉移酶類

3為水解酶類

4為裂解酶

(2)反應作用的位置,即可用於哪個基因

1.1 -CH-OH

1.2 -C=0

1.3 -C=CH

1.4 -C=NH

1.5 -CH-NH2

1.6 NADH、NADPH

(3)

1.1.1 氯化還原酶 CH-OH 受體:NAD+ NADP-

1.1.2 氯化還原酶 CH-OH 受體:細胞色素

1.1.3 氯化還原酶 CH-OH 受體:分子氧  

三、血清酶的去路:

(一)血清酶的排泄:P234

1.尿路:是血清低分子量酶類主要去路

2.膽汁不是血清酶排泄途徑

(二)肝或網狀內皮系統對血清酶的清除:

肝臟對以酶原形式存在的酶類有消除作用

(三)酶蛋白血管內的失活和分解:

(四)轉入其它體液  

四、酶的活性單位及生理差異:

(一)酶的活性單位:在規定條件,每分鐘催化1umol的基質發生轉化所需要的酶量。

規定條件包括:溫度、PH、緩衝系統、基質濃度及輔助因素

(二)酶的單位計算

1.根據標準計算:

(U/L)酶活力單位=A樣品/A標準×C標準×Vt/Vs×1/t×1000

總體積-樣品+基質

2.根據反應底物的消光係數:

酶活力=A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000

消光係數 比色杯厚度

(三)血清酶的生理差異:

1.性別:男>女

2.年齡:兒童 磷酸酶>成人 嬰兒 LDH 2倍成人

3.進食:對酶活力本身無影響,但可影響比色時的濁度

4.活動:

5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑  

五、疾病時血清酶改變的機制:

(一)合成異常:P238

1.合成減少

2.合成增加

(二)酶從損傷細胞中釋放增加:

是疾病時大多數血清酶↑的主要機制

(三)其它機制:

腎衰尿少→ 血澱粉酶↑

藥物,毒物可作為酶的抑制劑

2.AST的測定:

AST 穀草轉氨酶(GOT)

天門冬氨酸氨基移換酶

一、AST分布:

廣泛分布於人體各組織、器官中,主要在心、肝、骨骼肌、腎、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最豐富。

主要存在粒線體中(M-AST)。胞漿中(C-AST)僅佔12%,是可溶性的正常血清中AST很少,只有上述組織發生病變

時,才釋放入血。  

方法學介紹

(一)賴氏比色法:<實驗>P115

1.原理:

COOH COOH COOH COOH

(CH2)2 + CH2 AST (CH2)2 + CH2

C=O HC-NH2 37℃ HC-NH2 C=0

COOH COOH COOH COOH

酮戊二酸 天門冬氨酸 谷氨酸 草醯乙酸

COOH CH3

CH2 檸檬酸苯胺 C=0+CO2

C=0 脫羧 COOH

COOH

丙酮酸

CH3

C=0 + →丙酮酸-2.4- = +H2O

COOH 硝基苯腙

2.4-二硝基苯肼 酸性,草黃色,加鹼,棕紅色

與標準濃度丙酮酸生成的苯腙比色(505nm)

2.正常參考值:8-28u

3.注意事項

(1)溶血標本不能用於AST測定,因為RBC中AST是血清10倍。

(2)M-AST、C-AST理化性質,Ag性均不同,由不同基因控制,但催化相同反應,是同I酶

(3)賴氏比色法簡易性,相對準確性,所以是普及的原因

(4)難以確定在酶反應期內,產物的生成與時間成正比。

草醯乙酸是AST競爭抑制劑,隨反應進程,產物,酶反應不斷。

(5)顯色反應及底物濃度問題。

酮戊二酸也可與2.4-二硝基苯肼反應,產生另一棕色苯腙,使AST測定假陽性增高。

為了減少其干擾,波長選在490-530nm,此時丙酮酸為-酮戊二酸2倍

2.4-二硝基苯肼在鹼性溶液中也可呈色,使吸光度偽性增高。

(6)A、偶聯轉氨作用:

ALT

丙酮酸+谷氨酸丙氨酸

所以肝疾病AST、ALT同時,使丙酮酸消耗,AST測定結果減低。

B、產物旁路

乳酸

LDH ↑NADH+H+

丙酮酸

α-酮戊二酸+天門冬aa AST 草醯乙酸+谷aa.

↓MDH+NADH+H+

蘋果

所以受LDH、MDH干擾,使AST測定結果減低

(二)酶偶聯一些外連續監測法:

1.原理:L-天門冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草醯乙酸+谷aa.

草醯乙酸+NADH+H+ MDH L-蘋果酸+NAD+

340nm

吸光度下降值,計算AST活力

2.參考值:男<40u/L 37℃

女<35u/L 37℃

3.注意事項:

(1)采血後立即分離血清,避血溶血

血清與血塊不可長時間設置在一起

(2)血清,室溫4-8h,2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變

(3)抗凝劑血漿:

EDTA、2Na,肝素對AST無抑制作用

不能用草酸鹽抗凝劑,因為可抑制AST活性

(4)AST濃度過高,稀釋重做。

(5)不存在偶聯轉氨作用和產物旁路問題

(6)不存在 酮戊二酸干擾,可適當提高底物濃度使反應完全

(7)底物中存在谷氨酸脫氫酶(GLDH)

α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O

消耗NADH+H+,使結果偽性增高。

(8)轎清中丙酮酸LDH

丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+

消耗NDAH+H+,使結果偏高

(9)在指示酶作用有,草醯乙酸可自動脫羧生成丙酮酸,使結果偏低。應加LDH,使之成為乳酸,從而更加准

確反映AST活力。

所以MDH、LDH共同作為指示酶

三、臨床意義:

1.AST在心肌中含量最多,所以在急性心梗時6-12h↑,48h達高峰,3-5d恢復正常

2.急性肝炎,手術後,藥物中毒,AST明顯↑

肝Ca、慢性肝病心肌炎,AST中度

肌炎胸膜炎腎炎,AST輕度

3.急性肝炎,AST,ALT同時↑,可達正常值10-30倍,黃疸前期就已↑,有助於臨床早期診斷。

3.AST同I 酶:

<黃>血清酶測定時診斷心梗的意義:

心肌C、肝C出現實質性損害 M-AST C-AST↑

M-AST↑對肝病預後有一定診斷意義

心梗M-AST↑ 所以M-AST越↑,心梗並發心衰發病率死亡率越↑,尤其推測死亡率方面意義更大。

4.血清乳酸脫氫酶的測定: 原理 PH對其影響 

LDH 糖酵解酶,氧化還原反應

有五種同I酶LDH1-LDH5

一、LDH分布和特點:

廣泛分布,主要在腎,其次心,骨骼肌,其它肝、脾、胰、肺,上述組織病變,血清中LDH。主要催化以下反應:

L-乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+

PH鹼 正反應(L-P)

PH中性 逆反應(P-L)

二、方法學

(一)比色法:<實驗>P122

1.原理:L-乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+

PH8.8

丙酮酸+2.4-二硝基苯肼 → 丙酮酸-2.4-二硝基苯

酸 草黃色

加NaOH 棕紅色

顏色越深,酶活力越大

2.參考值:225-540u/dL

3.注意事項:產物生成量與反應時間不成比例

(1)標本嚴禁溶血 因為RBC內LDH活力是血清內的100倍。

(2)LDH受重金屬鹽、EDTA、草酸鹽的抑制。最好用血清標本

(3)血清標本2-6 數天,室溫48h

(4)準確性和重複性在酶學檢驗中最差,因為五種同I酶與底物結合能力不同,最適反應條件不同,在病理

LDH組成差異大,所以很難找出LDH最適反應條件。eg:心梗LDH1↑,肝病LDH5↑

(5)結果>2500u/dL,將標本稀釋重做。

(二)連續監測法(酶法):<實驗>P120

1.原理:L-乳酸+NAD+ PH8.8-9.8 丙酮酸+NADH+H+

逆反應比正反應速度快2-3倍 所以反應偏向左側,多用P-L

LDH

丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+

PH7.4

340nm處監測,吸光度下降幅度與LDH成正比。

2.參考值:240-460u/L 37℃

3.注意事項:

(1)逆反應優點:

a.試劑用量少,所需NAD+,只是L-P所用NADH+H+的3%,樣品少

b.單位時間內吸光度變化大,逆反應線性範圍較大,酶促反應速率比正反應快3倍,利於測定。 時間短

c.酶活力隨時間的線性關係較長

(2)正反應優點:

a.NADH+H+比NAD+穩定,價格低,易得到純品。

底物L-乳酸與逆反應底物丙酮酸穩定

b.L-乳酸對LDH的抑制低於丙酮酸對LDH的抑制

(3)連續監測法可利用正、逆反應,優於比色法。

(4)金屬離子的存在可以降低NAD+穩定性

試劑中可加入EDTA,使EDTA絡合金屬離子,增加NAD+穩定。

(5)NAD+不穩定,產生對LDH有抑制作用的物質。在鹼性液中比在酸性液中穩定,在Tris緩衝液中比在磷酸

鹽緩衝液中穩定。

(6)某些批號的NADH+H+還有LDH的物質,使用前檢查NADH+H+質量,NADH+H+溶於Tris緩衝液,分別在

260nm和340nm測吸光度,應<2.3,若>2.3,說明含有在260nm處有吸收峰的雜質,如NAD+、腺苷

(7)α-酮丁酸羥基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。

(8)標本不能溶血

三、臨床意義:

1.LDH↑:急性心梗、骨骼肌損傷、某些肝炎白血病肝硬化阻塞性黃疸惡性腫瘤

2.心梗:12-24h,LDH↑,48-72h達高峰,1-2W後恢復正常

3.惡性腫瘤晚期LDH,惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑

4.慢性腎小球腎炎、SLE、糖尿病腎病等病人中,尿LDH可達正常人3-6倍,尿中含多種抑制LDH活性物質,如尿素

小分子類。

低PH值也可抑制LDH活性。

5.尿毒症患者LDH正常,透析後LDH↑,因為體內尿素較高

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