心肌酶譜
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對心肌酶檢查,檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死或細胞膜通透性。
1.血清酶總論:P232
LDH、AST、CK及其同I酶,α-HBD
目錄 |
一、血清酶的來源和分類:
(一)根據來源及血漿中發揮作用:
1.血漿持異酶:主要在血漿中發揮催化作用的酶類
eg:凝血酶原,凝血因子(X、ⅫI、Ⅶ)纖溶酶原,前激肽釋放酶
銅藍蛋白:是一種氧化酶,與Fe蛋白,動員有關
脂蛋白脂肪酶:參與脂蛋白中脂肪的水解和儲存
2.外分泌酶
eg:唾液和胰澱粉酶,胰脂肪酶,胃蛋白酶,胰蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。
在血漿中很少發揮催化作用
其濃度與其分泌腺體的功能有關
在血液中無重要的催化作用
(1)一般代謝酶:無器官特異性
(2)組織專一性酶:OCT、SDH、ADH主要存在於肝。其活性能較特異地反映肝cell的病變。
(二)根據酶促反應性質可將酶分為六類:
CHO CHO
C=0+NADH+H+ LDH CH-OH+NAD+
COOH COOH
2.轉移酶類:催化底物之間進行某些基團的轉移或交換的酶類
COOH CH3 COOH CH3
(CH2)2 +HC-NH2 ALT (CH2)2 + C=0
C=0 COOH HC-NH2 COOH
COOH COOH
3.水解酶:催化底物之間發生水解反應的酶類
ALP
水解
4.裂解酶類:催化底物移去一個基因而留下雙鍵的反應或逆反應的酶類。
磷酸已糖激酶
6.合成酶類(連接酶類):催化兩分子底物合成-分子的化合物,同時必須偶聯有ATP磷酸鍵斷裂。
二、血清酶的命名:
1.習慣命名法:根據酶來源,催化反應性質及底物來命名。
底物:澱粉酶,蛋白酶
性質:脫氫酶、轉移酶
來源:胰澱粉酶、胃蛋白酶
底物+性質:穀草轉氨酶
2.系統命名法:酶反應底物、性質均要列出,各底物間以「:」隔開
編號:(1)1為氧化還原酶類
2為轉移酶類
3為水解酶類
4為裂解酶
(2)反應作用的位置,即可用於哪個基因
1.1 -CH-OH
1.2 -C=0
1.3 -C=CH
1.4 -C=NH
1.5 -CH-NH2
1.6 NADH、NADPH
(3)
1.1.1 氯化還原酶 CH-OH 受體:NAD+ NADP-
1.1.2 氯化還原酶 CH-OH 受體:細胞色素
1.1.3 氯化還原酶 CH-OH 受體:分子氧
三、血清酶的去路:
(一)血清酶的排泄:P234
2.膽汁不是血清酶排泄途徑
(二)肝或網狀內皮系統對血清酶的清除:
(四)轉入其它體液
四、酶的活性單位及生理差異:
(一)酶的活性單位:在規定條件,每分鐘催化1umol的基質發生轉化所需要的酶量。
規定條件包括:溫度、PH、緩衝系統、基質濃度及輔助因素
(二)酶的單位計算
1.根據標準計算:
(U/L)酶活力單位=A樣品/A標準×C標準×Vt/Vs×1/t×1000
總體積-樣品+基質
2.根據反應底物的消光係數:
酶活力=A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000
消光係數 比色杯厚度
(三)血清酶的生理差異:
1.性別:男>女
2.年齡:兒童 磷酸酶>成人 嬰兒 LDH 2倍成人
3.進食:對酶活力本身無影響,但可影響比色時的濁度
4.活動:
5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑
五、疾病時血清酶改變的機制:
(一)合成異常:P238
1.合成減少
2.合成增加
(二)酶從損傷細胞中釋放增加:
是疾病時大多數血清酶↑的主要機制
(三)其它機制:
藥物,毒物可作為酶的抑制劑
2.AST的測定:
AST 穀草轉氨酶(GOT)
天門冬氨酸氨基移換酶
一、AST分布:
廣泛分布於人體各組織、器官中,主要在心、肝、骨骼肌、腎、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最豐富。
主要存在粒線體中(M-AST)。胞漿中(C-AST)僅佔12%,是可溶性的正常血清中AST很少,只有上述組織發生病變
時,才釋放入血。
方法學介紹
(一)賴氏比色法:<實驗>P115
1.原理:
COOH COOH COOH COOH
(CH2)2 + CH2 AST (CH2)2 + CH2
C=O HC-NH2 37℃ HC-NH2 C=0
COOH COOH COOH COOH
酮戊二酸 天門冬氨酸 谷氨酸 草醯乙酸
COOH CH3
C=0 脫羧 COOH
COOH
丙酮酸
CH3
C=0 + →丙酮酸-2.4- = +H2O
COOH 硝基苯腙
2.4-二硝基苯肼 酸性,草黃色,加鹼,棕紅色
與標準濃度丙酮酸生成的苯腙比色(505nm)
2.正常參考值:8-28u
3.注意事項
(1)溶血標本不能用於AST測定,因為RBC中AST是血清10倍。
(2)M-AST、C-AST理化性質,Ag性均不同,由不同基因控制,但催化相同反應,是同I酶
(3)賴氏比色法簡易性,相對準確性,所以是普及的原因
(4)難以確定在酶反應期內,產物的生成與時間成正比。
草醯乙酸是AST競爭抑制劑,隨反應進程,產物,酶反應不斷。
(5)顯色反應及底物濃度問題。
酮戊二酸也可與2.4-二硝基苯肼反應,產生另一棕色苯腙,使AST測定假陽性增高。
為了減少其干擾,波長選在490-530nm,此時丙酮酸為-酮戊二酸2倍
2.4-二硝基苯肼在鹼性溶液中也可呈色,使吸光度偽性增高。
(6)A、偶聯轉氨作用:
ALT
丙酮酸+谷氨酸丙氨酸
所以肝疾病AST、ALT同時,使丙酮酸消耗,AST測定結果減低。
B、產物旁路
乳酸
LDH ↑NADH+H+
丙酮酸
↑
α-酮戊二酸+天門冬aa AST 草醯乙酸+谷aa.
↓MDH+NADH+H+
蘋果酸
所以受LDH、MDH干擾,使AST測定結果減低
(二)酶偶聯一些外連續監測法:
1.原理:L-天門冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草醯乙酸+谷aa.
草醯乙酸+NADH+H+ MDH L-蘋果酸+NAD+
340nm
吸光度下降值,計算AST活力
2.參考值:男<40u/L 37℃
女<35u/L 37℃
3.注意事項:
(1)采血後立即分離血清,避血溶血
血清與血塊不可長時間設置在一起
(2)血清,室溫4-8h,2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變
(3)抗凝劑血漿:
EDTA、2Na,肝素對AST無抑制作用
不能用草酸鹽抗凝劑,因為可抑制AST活性
(4)AST濃度過高,稀釋重做。
(5)不存在偶聯轉氨作用和產物旁路問題
(6)不存在 酮戊二酸干擾,可適當提高底物濃度使反應完全
(7)底物中存在谷氨酸脫氫酶(GLDH)
α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O
消耗NADH+H+,使結果偽性增高。
(8)轎清中丙酮酸LDH
丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+
消耗NDAH+H+,使結果偏高
(9)在指示酶作用有,草醯乙酸可自動脫羧生成丙酮酸,使結果偏低。應加LDH,使之成為乳酸,從而更加准
確反映AST活力。
所以MDH、LDH共同作為指示酶
三、臨床意義:
1.AST在心肌中含量最多,所以在急性心梗時6-12h↑,48h達高峰,3-5d恢復正常
3.急性肝炎,AST,ALT同時↑,可達正常值10-30倍,黃疸前期就已↑,有助於臨床早期診斷。
3.AST同I 酶:
<黃>血清酶測定時診斷心梗的意義:
心肌C、肝C出現實質性損害 M-AST C-AST↑
M-AST↑對肝病預後有一定診斷意義
心梗M-AST↑ 所以M-AST越↑,心梗並發心衰的發病率、死亡率越↑,尤其推測死亡率方面意義更大。
4.血清乳酸脫氫酶的測定: 原理 PH對其影響
LDH 糖酵解酶,氧化還原反應
有五種同I酶LDH1-LDH5
一、LDH分布和特點:
廣泛分布,主要在腎,其次心,骨骼肌,其它肝、脾、胰、肺,上述組織病變,血清中LDH。主要催化以下反應:
L-乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+
PH鹼 正反應(L-P)
PH中性 逆反應(P-L)
二、方法學
(一)比色法:<實驗>P122
1.原理:L-乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+
PH8.8
丙酮酸+2.4-二硝基苯肼 → 丙酮酸-2.4-二硝基苯腙
酸 草黃色
加NaOH 棕紅色
顏色越深,酶活力越大
2.參考值:225-540u/dL
3.注意事項:產物生成量與反應時間不成比例
(1)標本嚴禁溶血 因為RBC內LDH活力是血清內的100倍。
(2)LDH受重金屬鹽、EDTA、草酸鹽的抑制。最好用血清標本
(3)血清標本2-6 數天,室溫48h
(4)準確性和重複性在酶學檢驗中最差,因為五種同I酶與底物結合能力不同,最適反應條件不同,在病理
LDH組成差異大,所以很難找出LDH最適反應條件。eg:心梗LDH1↑,肝病LDH5↑
(5)結果>2500u/dL,將標本稀釋重做。
(二)連續監測法(酶法):<實驗>P120
1.原理:L-乳酸+NAD+ PH8.8-9.8 丙酮酸+NADH+H+
逆反應比正反應速度快2-3倍 所以反應偏向左側,多用P-L
LDH
丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+
PH7.4
340nm處監測,吸光度下降幅度與LDH成正比。
2.參考值:240-460u/L 37℃
3.注意事項:
(1)逆反應優點:
a.試劑用量少,所需NAD+,只是L-P所用NADH+H+的3%,樣品少
b.單位時間內吸光度變化大,逆反應線性範圍較大,酶促反應速率比正反應快3倍,利於測定。 時間短
c.酶活力隨時間的線性關係較長
(2)正反應優點:
a.NADH+H+比NAD+穩定,價格低,易得到純品。
底物L-乳酸與逆反應底物丙酮酸穩定
b.L-乳酸對LDH的抑制低於丙酮酸對LDH的抑制
(3)連續監測法可利用正、逆反應,優於比色法。
(4)金屬離子的存在可以降低NAD+穩定性
試劑中可加入EDTA,使EDTA絡合金屬離子,增加NAD+穩定。
(5)NAD+不穩定,產生對LDH有抑制作用的物質。在鹼性液中比在酸性液中穩定,在Tris緩衝液中比在磷酸
鹽緩衝液中穩定。
(6)某些批號的NADH+H+還有LDH的物質,使用前檢查NADH+H+質量,NADH+H+溶於Tris緩衝液,分別在
260nm和340nm測吸光度,應<2.3,若>2.3,說明含有在260nm處有吸收峰的雜質,如NAD+、腺苷。
(8)標本不能溶血
三、臨床意義:
1.LDH↑:急性心梗、骨骼肌損傷、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黃疸及惡性腫瘤。
2.心梗:12-24h,LDH↑,48-72h達高峰,1-2W後恢復正常
3.惡性腫瘤晚期LDH,惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑
4.慢性腎小球腎炎、SLE、糖尿病腎病等病人中,尿LDH可達正常人3-6倍,尿中含多種抑制LDH活性物質,如尿素,
小分子肽類。
低PH值也可抑制LDH活性。
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