基因診斷與性病/支原體性感染症

跳轉到: 導航, 搜索

基因診斷與性傳播疾病

非淋菌性泌尿生殖道炎
- 衣原體感染症
- 支原體性感染症

生殖器支原體（Mycoplasmasemtalium）感染是近年新明確的一種性接觸傳播疾病。

支原體（Mycoplasmal）是目前所能發現的能在無生命培基中生長繁殖的最小的微生物。它廣泛分布於自然界，有80餘種，與人類有關的支原體有肺炎支原體（M-pneumonie，Mp）、人型支原體（M.humenis，MH）、解脲支原體（Ureaplasma urealyticum，UU）和生殖器支原體（M.genitalium，MG），前者引起肺炎，後三者引起泌尿生殖道感染。支原體體形多樣，基本為球形，亦可呈球杆狀或絲狀，其菌落呈針尖大小，故又稱之為微小支原體。支原體特點是無細胞壁及前體，細胞器極少。DNA的G+C含量低，菌體內具有非常小的染色體組，其分子量約為45×108，菌體細胞大小約為0.2-0.3μm，很少超過1.0μm。由三層蛋白質和脂質組成的膜樣結構以及一層類似毛髮結構組成。支原體由二分裂繁殖，形態多樣。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長。用培養基培養。營養要求比細菌高。由於它沒有細胞壁，因此對影響細胞壁合成的抗生素，如青黴素等不敏感，但紅霉素、四環素、卡那黴素、鏈黴素、氯黴素等作用於核蛋白體的抗生素，可抑制或影響支原體的蛋白質合成，有殺傷支原體作用，支原體對熱抵抗力差，通常55℃經15分鐘處理可使之滅活。石碳酸，來蘇兒易將其殺死。在培養基中置入脲素並以硫酸錳作指示劑極易與其他支原體作出鑒別。

二、流行病學

由於診斷條件所限和命名上的問題。國內尚無系統的人群調查資料，支原體可存在於健康攜帶者，而在性亂者、同性戀、妓女、淋病患者中檢出率較高，我國報導7個地區健康人攜帶率為解脲支原體（UU）佔10.59%，人型支原體（MH）佔5.34%。性亂者UU的檢出率為71.7%，MH為19.57%。調查表明，性伴數越多，性活躍指數越大，UU和MH感染率越高。

三、傳播途徑

成人主要通過性接觸傳播，新生兒則由母親生殖道分娩時感染。成人男性的感染部位在尿道粘膜，女性感染部位在宮頸。新生兒主要引起結膜炎和肺炎。

四、發病機理與免疫

支原體只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細胞表面的受體上，而不進入組織和血液。支原體引起細胞損害的原因為：粘附於宿主細胞表面的支原體從細胞吸收營養，從細胞膜獲得脂質和膽固醇，引起細胞損傷；支原體代謝產生的有毒物質，如溶神經支原體能產生神經毒素，引起細胞膜損傷；脲原體含有尿素酶，可以水解尿素產生大量氨，對細胞有毒害作用。支原體除可以粘附於細胞、巨噬細胞表面外，還可以粘附於精子表面，從而阻止精子運動，其產生神經氨酸酶樣物質可干擾精子與卵子的結合。這就是支原體感染引起不育不孕的原因之一。

在動物實驗發現，小鼠腹腔巨噬細胞可以殺滅支原體，而中性粒細胞的作用不大。在體外，IgG1和IgG2抗體有調理作用。可加強巨噬細胞對支原體的殺傷作用。

五、臨床表現

潛伏期為1-3周，典型的急性期症状與其他非淋病性生殖泌尿系統感染相似，表現為尿道刺痛，不同程度的尿急及尿頻、排尿刺痛，特別是當尿液較為濃縮的時候明顯。尿道口輕度紅腫，分泌物稀薄，量少，為漿液性或膿性，多需用力擠壓尿道才見分泌物溢出，常於晨起尿道口有少量粘液性分泌物或僅有痂膜封口，或見污穢褲襠。約有三分的病人可無任何自覺症状。只是在例行檢查時才被發現。50%病人初診被忽略或誤診，約有10%-20%的患者同時有淋球菌雙重感染。

亞急性期常合併前列腺感染，患者常出現會陰部脹痛、腰酸、雙股內側不適感或在做提肛動作時有自會陰向股內側發散的刺痛感。肛診時前列腺縱溝不明顯或表面類似核桃殼凹凸不平，少數病例B型超聲波診斷可證實不同程度的增大。合併副睾炎者不多見。

女性患者多見以子宮頸為中心擴散的生殖系炎症。多數無明顯自覺症状，少數重症病人有陰道墜感，當感染擴及尿道時，尿頻、尿急是引起病人注意的主要症状。感染局限在子宮頸，表現為白帶增多、混濁、子宮頸水腫、充血或表面糜爛。感染擴及尿道表現為尿道口潮紅、充血、擠壓尿道可有少量分泌物外溢，但很少有壓痛出現。

支原體感染常見的合併症為輸卵管炎，少數患者可出現子宮內膜炎及盆腔炎。

六、診斷及鑒別診斷

（一）臨床診斷

有不潔性交史，有尿道、陰道分泌物及排尿灼痛表現者而又排除其他病原體感染的可能性，取尿道或宮頸分泌物塗片，在1000倍顯微鏡下可見多形核白細胞≥5個，可作初步診斷。

（二）實驗診斷

支原體感染的實驗室診斷主要是支原體的培養和血清學鑒定，目前主要採用基因診斷。

1．支原體培養：

a．採集標本，一般為泌尿生殖試子或刷片，少數取前列腺液，精液、關節液，或取輸卵管，直腸活檢物，近年來用初段尿標本離心物，以取代尿道拭子。拭子取材時，將拭子插入男性尿道2-4cm，用力擦取。該方法容易造成尿道損傷及繼發感染。用時須慎重。女性則需先清潔宮頸鱗狀與柱狀上皮結合部，用細胞刷收集宮頸標本，能增加感染細胞的數量，較棉拭子敏感性高。

b．常用培養基為牛心浸液或蛋白腖，並含1%新鮮酵母浸液，10-20%動物血清及0.5%氯化鈉，還可加葡萄糖和精氨酸以促進MH和MG生長，加入尿素以供UU代謝，適量加青黴素抑制雜菌。

2．血清學鑒定法：最常用的是瓊脂擴散法，即將支原體接種到瓊脂皿上。然後再用浸過適量血清的濾紙放到瓊脂表面，觀察哪一種能抑制支原體生長。也可用瓊脂表面的菌落作熒光抗體染色法，用落射熒光顯微鏡觀察，此法的優點是可以利用最初生長在瓊脂表面上的菌落而不必將支原體傳代。

血清學診斷試驗：酶聯免疫吸附試驗（ELISA）敏感性高：微量免疫熒光法（MIF）具有快速特點。

3．基因診斷：利用DNA探針對支原體診斷其敏感性稍差，但特異性高，用聚合酶鏈反應（PCR），敏感性、特異性均高。具體檢測方面如下：

（1）標本處理

1．取材部位為子宮頸管，男性為尿道，將滅菌白金耳深入宮頸管或尿道1cm左右，轉動數圈，停留約30s，取出後置標本緩衝液中。

2．解脲脲原體DNA提取：

將宮頸管內或尿道內刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20，1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES緩衝液（50mmol/l Tris-HCl，50mmol/L NaCl，100mmol/ L EDTA，pH 8.0），置37℃裂解60 min，沸水5min，酚，氯仿抽提DNA乙醇沉澱，沉澱物溶於20μl TE緩衝液(100mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，pH 8.0)。

（2）引子設計

引子來源於解脲脲原體，脲酶基因序列：

UU1：CAGATACATTAAACGAAGCAGG（1613-1635）

UU2：GTGGTGACATACCATTAAC（1837-1819）

（3）PCR擴增

傳統的方法為的反應體積為100μl，含5x反應緩衝液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4種dNTP各200μmol/L以及引子對各25pmol/L。上述成分預先一次性分裝於0.5ml離心管，-20℃備用。臨用加模板DNa 2μl，短暫離心，加100μl礦物油覆蓋。現在試劑已商品化，反應體積為25μl，單管已分裝好，只要加入模板DNA即可。置DNA擴增儀進行40次循環擴增。每次循環包括90℃變性45s(第一次循環變性2min)，55℃退火30s和72℃延伸40s（最後一次循環72℃，延伸5min）三個步驟。每次擴增均應作陰陽性對照。

（4）擴增產物的檢測

1．1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測：取10u lPCR擴增物作1.5%瓊脂糖凝膠電泳、0.5μg/ml溴化乙錠染色，以PGEM-3Zf（+）DNA-Hae Ⅲ為分子量標準，置紫外透射儀觀察結果。

2. 治療：治療基本同衣原體治療。強力黴素100mg口服，每日2次，連服7-14天或阿齊黴素1g，單劑量口服，半衰期長達60小時，一次口服，可維持有效濃度5天；氟嗪酸0.2，口服，每日2次，連服7-14天。