醫院藥學/中草藥化學成分一般鑒別方法
| 醫學電子書 >> 《醫院藥學》 >> 醫院藥品檢驗 >> 中草藥化學成分一般鑒別方法 |
| 醫院藥學 |
|
|
（1）加熱或礦酸試驗：取檢品的水溶液1ml於試管中，加熱至沸或加5％鹽酸，如發生混濁或有沉澱示含有水溶性蛋白質。
（2）縮二脲試驗：取檢品的水溶液1ml，加10％氧化鈉溶液2滴，充分搖勻，逐漸加入硫酸銅試液，隨加搖勻，注意觀察，如呈現紫色或紫紅色示可能含有蛋白質和胺基酸。
凡蛋白質結構中含有兩個或兩個以上肽鍵（－CONH－）者均有此反應，能在鹼性溶液中與Cu2+生成仙絡合物，呈現一系列的顏色反應，二肽呈藍色，三肽呈紫色，加肽以上呈紅色，肽鍵越多顏色越紅。
（3）茚三酮試驗，取檢品的水溶液1ml，加入茚三酮試液2-3滴，加熱煮沸4-5分鐘，待其冷卻，呈現紅色棕色或藍紫色（蛋白質、腖類、肽類及胺基酸）。
α胺基酸與茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被還原成仲醇，與所後成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍紫色的化合物。
【注】①茚三酮試劑主要是多肽和胺基酸的顯色劑，反應在1小時內穩定。試劑溶液pH值以5-7為宜，必要時可加吡啶數滴或醋酸鈉調整。
②此反應非常靈敏，但有個別胺基酸不能呈紫色，而呈黃色，如脯氨酸。
（4）胺基酸薄層層析檢出反應：
②展開劑：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5）
③顯色劑：0.5％茚三酮丙酮溶液，噴霧後於1100烘箱放置5分鐘，顯藍紫允或紫色。
2．皂甙
（1）泡沫試驗：取檢品的水溶液2ml於帶塞試管中，用力振搖3分鐘，即產生持久性蜂窩狀泡沫（維持10分鐘以上），且泡沫量不少於液體體積的1／3。
【注】常用的增溶劑吐溫、司盤，振搖時均能產生持久性泡沫，要注意區別。
（2）溶血試驗：取試管4支，分別加入濾液0.25、0.5、0.75 ml，然後依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5 ml，使每一個試管中的溶液都成為2.5ml, 再將各試管加入2％的血細胞懸液2.5ml，振搖均勻後，同置於370水浴或25－270的室溫中注意觀察溶血情況，一般觀察3小時即可，或先滴紅細胞於顯微鏡下，然後滴加檢液看血細胞是否消失。如有溶血現象示正反應。
【注】①鞣質對血紅細胞有凝集作用，干擾溶血試驗的觀察，應事先除去（可用取勝醯胺粉吸附或用明膠沉澱）。
②檢液應為中性溶液。
（3）醋酐濃硫酸試驗（Liebrmann Burchard反應）取檢品的水溶液置蒸發皿中，於水浴上蒸干，殘渣加入少量冰醋酸使溶解，再加入醋酐濃硫酸（19：1）試液，呈現紅紫色並變成污色綠色（甾類、三萜類成分或皂甙）
（4）區別甾體皂甙和三萜皂甙：取帶塞試管兩支，各盛檢品的水溶解1 ml，1支加0.1N鹽酸溶液2ml，另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘（需左右手交替振搖各半分鐘），觀察兩管泡沫的多少，若兩管泡沫體積相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加鹼管泡沫多於加酸管示含甾示含甾體皂甙。
三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩定的泡沫；甾體皂甙為中性皂甙在鹼笥溶液中能形成較穩定的泡沫。
3．糖、多糖或甙類
（1）鹼性酒石酸銅試液：取檢品的水溶液1－2ml（如為醇溶液須將醇蒸發除去），加入鹼笥酒石酸銅試液1ml，於沸水浴上加熱5分鐘，產生棕紅色或磚紅色氧化亞銅沉澱，示有還原糖。
還原糖能使二價銅鹽（藍色）還原成氧化亞銅，醛糖的醛基氧化成羧基：
【注】①如檢液呈酸性，應先鹼化。
②此反應所產生的沉澱由於條件不同，其顏色也不同，質點上的呈黃色，質點大的呈紅色。有保持性膠體存在時，也常產生黃色沉澱。
③職樣品中含有其他醛、酮及還原較強的其他成分，或中劃藥製劑中附加的抗氧劑、；葡萄糖等均可顯陽性反應。
（2）α萘酚試驗（Molisch紫環反應）：取檢品的水溶液1ml，加5％萘酚試液數滴振搖後，沿管壁滴入5-6滴濃硫酸，使成兩液層，待2-3分鐘後，兩層液面出現紫紅色環（糖、多糖或甙類）。
多糖類遇濃硫酸被水解成單糖，單糖被濃硫酸脫水閉環，形成糠醛類化合物，在濃硫酸存在下與α萘酚發生酚醛縮合反應，生成紫紅色縮合物。
【注】①甙的分子結構中含有糖基，一般屬於單糖類，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（雙糖）或多分子糖（多糖）。在上述反應條件下，甙被水解成單糖，因此甙萘酚試驗，系分子中糖部分的反應。
②由於此反應較為靈敏，如有微量濾紙纖維或中草藥粉末存在於溶液中，都能產生上述反應。故濾過時應加註意。
（3）多糖的確證試驗：取檢品的水溶液5ml於水 蒸發至干，加入1ml蒸餾水，再加入乙醇5ml，如出現沉澱，濾過收集後用少量熱乙醇洗滌，再將沉澱物溶於3ml蒸餾水中，做下例試驗。
①碘試驗：取檢品的不溶液1ml，加碘試液1滴，觀察顏色變化，如呈藍黑色為地衣糖；紫黑色為糊精；藍色加熱消失，冷後藍色再現為澱粉。
②多糖水解：取檢品的水溶液1ml，加入稀鹽酸5滴，置沸水浴中加熱10-15分鐘，然後用10％氫氧化鈉液中和至中性，再加新配製的鹼性酒石酸銅試淮4滴，另取檢液1ml，不加酸水解直接加入上述試液4滴，兩管同置水浴上煮沸5-6分鐘。如果水解後生成棕紅色常常物的量比未經水解的多，則示有多糖。
多糖水解後產生單糖，利用單糖的還原性，使銅離子還原成氧化亞銅。
4．鞣質及酚類
（1）三氯化鐵試驗：取檢品的水溶液1ml，加三氯化鐵試液1－2滴，呈現綠色、污綠色、藍黑色或暗紫色（可水解鞣質顯藍一藍黑色，縮合鞣 顯綠色一污綠色）。
鞣質均是多羥基酚的衍生物，即多元酚，能和三價鐵離子發生顏色反應生成複雜的絡鹽。
【注】此反應如遇有礦酸或有機酸、醋酸鹽等存在，能阻礙顏色的生成。硝基酚類對三氯化鐵試劑無明顯反應。
（2）明膠試驗：取檢品的水溶液1ml，加氯化鈉明溶液2-3滴，即生成白色沉澱物。
鞣質有凝固蛋白的性能。
（3）溴試驗：取檢品的水溶液1ml，加溴試液1－2滴，生成白色或沉澱物，示可能含有酚或兒茶酚鞣質。
【注】過多的溴會阻礙鞣質的沉澱，因此溴水不宜多加。
（4）香草醛一酸試驗：取檢品的水溶液點於濾紙片上，干後，噴霧或滴加香草醛一鹽酸試液，呈現紅色斑點（多元酚類物質）。
（5）鞣質、酚類薄層層析檢出反應：
①吸附劑：聚醯胺；矽膠；矽膠；石膏：水（5：1：7）調成狀，塗成薄板，1050烘乾45分鐘。
②展開劑：乙醇：醋酸（100：2）；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）。
③顯色劑：10％三氯化鐵溶液；1％三氯化鐵乙醇溶液與1％鐵氰化鉀水溶液（1：1）顯藍一紫色斑點。
5．黃酮及其甙類
（1）鹽酸一鎂（或鋅）粉試驗：取檢品的乙醇溶液1ml，加放少量鎂粉（或鋅粉），然後加濃鹽酸4-5滴，置沸水浴中加熱2-3分鐘，如出現紅色示有游離黃酮類或黃酮甙（以同法不加鎂或粉做一對照，如兩管都顯紅色則有花色素存在。如繼續加碳酸試液使成鹼笥即變成紫色雙轉變為藍色，即證明含花色素）。
黃酮類的乙醇溶液，在鹽酸存在的情況下，能被鎂粉還原，生成花色甙元而呈現紅色或紫色反應（個別為淡黃色、橙色、紫色或藍色）。這是由於酮類化合物分子中含有一個鹼性氧原子，致能溶於稀酸中被還原成帶四價的氧原子即鋅鹽。本法是鑒別黃酮類的一個反應。但花色素本身在酸性下（不需加鎂粉）呈紅色，應加以區別。
【注】①此反慶僅在化學結構中，第三位上帶羥基的酮醇類顯色較明顯，而其它黃酮烷酮類均不甚明顯。因此試驗呈陰性反慶是不能做出否定的結論，尚需結合其他實驗再做結論。
②試驗應在醇中進行，水分多會影響顏色的生成。此反慶較慢，有時需置水浴上加熱，以促使反應的進行。
（2）熒光試驗：
①三氯化鋁試驗：取檢品的乙醇溶液點於濾紙片上（干後再點1次，使其濃度庥中），干後，噴霧1％三氯化鋁乙醇試液，在紫外光燈下觀察，呈現黃色、綠色、橙色等熒光為黃酮類；呈現天藍色或黃綠色；熒光，則為二氫黃酮類。這是區別二氫黃酮類化合物的一種鑒別反應。
②硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗：取檢品的乙醇溶液1ml，在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10％枸櫞酸丙酮溶液各0.5ml，蒸去丙酮後，在紫外光燈下觀察，管內呈現強烈的綠色熒光（黃酮或其甙類）。
（3）鹼液試驗：取檢品的乙醇溶液點於濾紙片上（干後，再點一次，使其溶液集中），干後，噴1％碳酸鈉溶液或在氨蒸氣中熏幾分鐘，呈現亮黃、綠或橙黃色。如將氨氣熏過的濾紙露置空氣中，顏色逐漸裉去而變為原有的顏色（黃酮或其甙類）。
|
試劑 |
一 |
NH3 |
AICI3 |
Na2CO3 |
|||||
|
光線 |
ViS. |
U.V |
ViS. |
U.V |
ViS. |
U.V |
ViS. |
U.V |
|
|
化 合 物 |
黃酮 |
淡黃 |
暗棕、紅棕、黃棕 |
黃 |
亮黃 |
淡黃 |
亮黃 |
||
|
黃酮醇 |
淡黃 |
亮黃、黃綠、棕 |
黃 |
亮黃、黃綠、綠 |
黃 |
黃、黃棕、暗藍 |
|||
|
異黃酮 |
無色 |
淡黃、紫 |
無色 |
淡黃、紫 |
無色 |
淡綠 |
|||
|
兒茶精 |
無色 |
無色 |
無色 |
淡藍黑 |
無色 |
||||
|
二氫黃酮 |
無色 |
無色** |
無色 |
無色、淡黃、淡綠 |
無色 |
淡黃、綠 |
|||
|
花色甙 |
紅、橙紫 |
深紅、橙紫、淡棕 |
藍 |
暗藍 |
|||||
|
查耳酮 |
黃 |
棕、黑、黃棕 |
黃、橙、紅 |
橙、紅、紫黑 |
黃、橙 |
橙*、棕、紅 |
橙、藍紅 |
||
*示有熒光＊＊示在短波紫外線光下為黑色ViS. 系可風光U.V系紫外光
6．蒽醌及其甙類 取檢品的乙醇溶液10ml，蒸去乙醇，殘渣加5％氫氧化鈉溶液2-3ml，在沸水中加15分鐘，冷後濾過，濾液加稀鹽酸酸化，加乙醚提取，取乙醚提取液做下列檢查：
（1）鹼液試驗：取上述乙醚溶液，加等量1％氫氧化鈉溶液，搖勻，水層呈現紅色，加入少許3％過氧化氫溶液，在沸水浴中加熱4分鐘，紅色不裉，當加酸酸化後，紅色消失。加鹼鹼化後紅色又出現（蒽醌類化合物反應）。
1，8一二羥基蒽醌的酚羥基遇氫氧化鈉生成鈉鹽，而呈現紅色，遇酸顯黃色。
【注】蒽醌和二蒽酮與鹼液不顯紅色，只呈黃色，但以氧化羥基蒽醌後遇鹼即顯紅色。
（2）醋酸鎂試驗：取上述醚溶液1ml，蒸去乙醚，殘渣加入乙醇1ml溶解，加入1％醋酸鎂甲醇溶液3滴，顯紅色（如顯橙黃色可能為二氫蒽醌）。
羥基蒽醌類與醋酸鎂甲醇溶液反應可顯橙、紅、藍、紫等色，產生這些顏色的必要投機倒把至少有一個α位羥基。加羥基的位置不同，產生的顏色也不同。一般在同一苯環上有兩個α羥基者顯紫紅色或藍色；如同一苯環在有兩個鄰位的羥基，一個α位，一個β位，顯紫色或紫鍇。其他α羥基蒽醌一般呈橙至紅色。因此這一顏色反應僅可作蒽醌的檢只識用，而且還可初步判斷羥的基的位置。
【注】醋酸鎂試驗亦可用濾紙斑點顯色法進行。
（3）蒽醌薄微量檢出反應：
①吸附劑：矽膠；中性氧化鋁（Ⅲ級）；矽膠G濕法制板。
②展開劑：苯：醋酸（6：3）石油醚：丙酮：水（5：3：3：5）；苯甲酸酯：甲酸（74：24：1）。
③顯色劑；5％氫氧化鈉液（顯紅色）；1％醋酸鎂甲醇溶液（顯黃色）。
此外亦可在紫外燈光下觀察熒光。
7．強心甙
（1）3，5一二硝基苯甲酸試驗（Kedde』s反應）：取檢品的乙醇溶液2 ml，加3，5一一硝基苯甲酸試液3-4滴再加10％氫氧化鈉溶液2滴，呈現紅色或紫紅色（9為α、β不飽和內酯環強心甙的反應）。
（2）鹼性苦味酸試驗：取檢品的醇溶液1ml，顯橙色或橙紅色（此反應常在15分鐘後，顯色最明顯）。
（3）亞硝醯鐵氰化鈉試驗（Legal反應）：取檢品的醇溶液1ml，蒸去溶劑，放冷後，加吡啶 少許使殘渣溶解，加0.5%亞鐵試液4-6滴，搖勻，再加入10％氫氧化鈉1－2滴，即顯紅色並逐漸消失（為檢查強心甙元的反應）。
（4）三氯化鐵水醋酸試驗（Keller反應）：取檢品的乙醇溶液2ml，蒸去溶劑，殘渣加0.5%三氯化鐵冰醋酸溶液1ml，使溶解後，沿試管壁加入濃硫酸1ml，在兩液界面顯紅棕色環，繼則變為淺綠、藍色，而冰醋酸層顯藍色，示含α去氧糖強心甙。
（5）醋酐一濃硫本試驗（Liebirman Barchard 反應）：取檢品的乙醇溶液2 ml，置蒸發皿中，於水浴上蒸干，殘渣加冰醋酸1ml使溶解，再加入醋酐一濃硫酸（19：1）數滴，呈現黃→紅→藍→紫→污綠色，並逐漸裉色。因顏色變化很快，須注意觀察（為檢查強心甙分子結構中甾體母核的反應）。
【注】①試驗1，2，3，的反應，均系在較強的鹼性條件下進行，當有蒽醌存在時，須先將檢液置水浴上蒸去乙醇，再加乙醚適量，用1％氫氧化鈉溶液反覆萃除蒽醌（棄去紅色鹼液），然後將乙醚溶液於水浴上蒸去乙醚 ，殘渣再用乙醇溶解後，供試驗用，以免干擾。
②試驗4的反應僅對游離的去氧糖和結合的甙呈正反應。但當α去氧糖與葡萄糖等其他糖結合的多，如不水解則為負反應。
③上述鑒別反應均呈陽性,可判斷為強心甙。
8．內酯、香豆精及其甙類：取檢品的乙醇溶液10m1，加5％鹽酸溶液10，在沸水浴 中熱15－20分鐘，冷後，加苯提取將苯提取液於水浴上蒸干（避火），殘渣加適量乙醇溶解後，供做下列檢查：
（1）異羥肟酸鐵試驗：取上檢液2ml，加鹽酸羥試液2滴，10％氫氧化鉀的甲醇溶液2滴，在水浴上微熱，冷卻，用稀鹽酸酸化，加入15三氯化鐵試劑液1－2滴，顯紫色苛橙紅色。
內酯及香豆素類在鹼性條件下，與羥反應生成異羥肟酸，與鐵鹽絡合而顯色。
（2）內酯試驗：取上檢液2ml，加1％氫氯化鈉溶液2m1，在沸水浴中加熱3-5分鐘，如溶液較前澄明，加酸酸化後又變混濁為正反應。
內酯化合物在熱鹼溶液中，開環成鹽而溶於水，酸化則重新閉環，而出內酯化合物，溶液即變混濁。
（3）重氮化反應：取上檢液1ml，加等體積3％碳酸鈉溶液，在沸水浴中加熱3-4分鐘，冷後，加入新配製的重氮化試劑1－2滴，即顯紅色。
（4）熒光反應：取上檢液點於濾紙上（干後，再點1次，以集中濃度），在紫外光燈下觀察，如為羥基香豆精應呈現藍色熒光，熏氨蒸氣後變為黃綠色熒光。呋喃香豆精應呈現藍色或黃棕色的熒光。
9．樹脂類 取檢品的乙醇溶液1ml，加1－2％氫氧化鈉溶液2-3ml，顯渾濁或沉澱，在水浴上加3-5分鐘，溶液變清或沉澱減少，加酸酸化則又渾濁或沉澱，示含有酸性樹脂。如在上項反太中，當加鹼加熱後，溶液仍渾濁示含有中性樹脂。
因酸性樹脂能溶於鹼液中，加熱後就成澄明液。中性樹脂則不溶於鹼性溶液中，故溶液仍顯渾濁。
10．生物鹼 取檢品的酸性乙醇溶液20ml，調節pH值至6-7，蒸發除去乙醇，殘渣加5％鹽酸溶液4-5ml溶解，濾過，濾液供下列檢查：
（1）碘化鉍鉀試液1ml，加碘化鉍鉀試液1－2滴，生成黃色或橘紅色沉澱。
AIK＋BiI3.KI→AIK.BiI3.KI↓
（生物鹼）（碘化鉍鉀） （桔紅色）
（2）碘化汞試驗：取濾液1ml加碘化汞鉀試液1－2滴，生成白色淡黃色沉澱物。
AIK＋KI.HgI2→AIK.KI.HgI2↓
若在過量的試劑中其沉澱又復溶解。
（3）碘一碘化鉀試驗：取濾液ml，加碘化一碘化鉀試液1－2滴，出現棕色沉澱或混濁。
（4）矽鎢酸試驗：取濾液1m1，加矽鎢酸試液1－2滴，生成灰白色或淡黃色沉澱。加熱可使反應靈敏。
（5）生物鹼呈色反應：
|
生物鹼名稱 |
呈色反應 |
生物鹼名稱 |
呈色反應 |
||
|
甲醛硫酸試液 |
鉬酸銨一硫酸試液 |
||||
|
紫→深紫 紫堇→藍 紫藍→藍 紫堇→藍 深紅→棕 紅橙 |
紫→棕綠 紫堇→綠 綠→藍 綠→藍 紫堇→綠 紅紫 |
紫堇→橙 橙 橙 茶 一 紫→褐 |
綠 一 一 一 黃 綠→紅黃 |
||
11．有機酸
（1）溴酚藍試驗：取檢品的酸性乙醇溶液點於濾紙，干後，噴霧0.1％溴酚藍乙醇溶液（70％乙醇），立即在藍色背景中顯黃色斑點。如不明顯，可噴霧氨水，然後暴露在鹽酸氣體中，背景逐漸由藍色變為黃色，而有機酸的斑點仍然為藍色。
（2）酸鹼度試驗：取檢品液（水提取液）以pH試紙檢查，如試紙顏色指示pH在7以下，可能含有有機酸。
（3）紙層析檢出試驗：見紙層析操作方法。
①支持劑：新華濾紙（中速）
②展開劑：正丁醇：醋酸：水（4：1：5）。
③顯色劑：0.15溴酚藍乙醇溶液（70％乙醇）。
結果：呈現藍色斑點。
12．揮發漬及油脂
（1）取檢品的乙醚溶液，置蒸發皿中，待溶劑揮發生，殘渣為油狀物，並有香氣或特異自氣，加熱，油狀物減少或消失示含揮髮油。如無香氣，或加狀物不減少，可能為油脂，可於殘渣中加入少許無水硫酸鈉顆粒，直火加熱，如產生氣泡，並有剌激性特臭的濃白色氣體（丙烯醛），示含油脂類化合物。
（2）取檢品的乙醚溶液，點在濾紙上，待溶劑揮發生，噴霧0.05%熒光素鈉溶液，再將濾紙下置碘蒸氣上，熏幾分鐘，產生黃或黃綠色斑點，背景為粉紅色示含揮髮油。
（3）取檢品的乙醇溶液，置白瓷皿中，待溶劑揮發生，殘渣中加1％香草醛鹽酸液，顯黃色、紅、棕、藍、紫等顏色，示含揮髮油。
（4）揮髮油薄層微量檢出反應：
①吸附劑：矽膠G（濕法制板）；中性氧化鋁：石膏：水（5：1：7）。
②展開劑：正已烷：乙酸乙酯（85：15）；石油醚：乙酸乙酯（85：15）。
③顯色劑：含5％香草醛的濃硫酸液（臨用新配）1050烘2-10分鐘；熒光照射；濃硫酸。
 甾體類、三萜類 | 熱原檢查法  |
| 關於「醫院藥學/中草藥化學成分一般鑒別方法」的留言： |  訂閱討論RSS
|
|
目前暫無留言 | |
| 添加留言 | |