醫學微生物學/腎症候群出血熱病毒

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醫學微生物學

出血熱病毒
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腎症候群出血熱（Hemorrhagic fever with renalsyndrome,HFRS）是由HFRS病毒引起，由鼠類等傳播的自然疫源性急性病毒性傳染病。以往此病在中國和日本被稱為流行性出血熱，在朝鮮和韓國被稱為朝鮮出血熱，在前蘇聯被稱為遠東出血熱和出血性腎炎，在斯堪的納維亞國家被稱為流行性腎病。1980年世界衛生組織將其統一命名為腎症候群出血熱。

HFRS病毒首先由韓國李鎬汪等在1978年從該國疫區捕獲的黑線姬鼠肺組織中分離出，並根據分離地點稱為漢灘病毒（Hantaan virus）。此後各地相繼從不同動物及病人體內分離出許多株病毒，現國際上通稱為HFRS病毒。根據此病毒的形態學和分子生物學特徵。目前已將其歸入尼亞病毒科(Bunyaviridae)，另立為一個屬，命名為漢坦病毒屬(Hantavirus)。

一、生物學性狀

（一）形態結構

病毒體呈圓形或卵圓形，直徑90～110nm，有囊膜，囊膜上有突起。HFRS病毒的核酸為單股負鏈RNA，分為L、M、S三個片段。分子量分別為2.7×106、1.4×106和0.6×106道爾頓。三個片段的鹼基序列互不相同，但都具有同樣的3′末端，為「3′AUCAUCAUCUG」，這一序列不同於布尼亞病毒科的其他屬病毒。HFRS病毒具有四種蛋白組成，即N、G1、G2和L。N為核蛋白，由S片段編碼，其主要功能是包裹病毒RNA的三個片段，該蛋白免疫原性強。G1和G2均為糖蛋白，由M片段編碼，上面有中和抗原位點和血凝活位點。這二種抗原位點是獨立存在的，但也可部分重疊。L為RNA多聚酶，由L片段編碼，在病毒複製中起重要作用。HFRS病毒的成熟方式為芽生成熟，其成熟過程與細胞的高爾基氏體和內質網有關。病毒在pH5.6～6.4時可凝集鵝紅細胞。

（二）培養特性

多種傳代、原代及二倍體細胞均對HFRS病毒敏感，實驗室常用非洲綠猴腎細胞（VeroE6）、人肺癌傳代細胞（A549）等來分離培養該病毒。病毒在細胞內一般不引起可見的細胞病變，通常需採用免疫學方法檢測證實。易感動物有多種，如黑線姬鼠、長爪沙鼠、小白鼠、大白鼠等，但除了小白鼠乳鼠感染後可發病及致死外，其餘均無明顯症状。

（三）病毒型別

已證實HFRS病毒與其他出血熱病毒無關，與布尼亞病毒科其他4個屬的病毒也無血清學關係。採用血清學方法（主要是空斑減少中和試驗）以及RT—PCR技術和酶切分析方法，可將HFRS病毒分為不同型別，即漢灘病毒（Ⅰ型，又稱野鼠型）、漢城病毒（Ⅱ型，又稱家鼠型）、普馬拉病毒（Ⅲ型，又稱棕背鼠型）、希望山病毒（Ⅳ型，又稱草原田鼠型）、泰國病毒（Ⅴ型）、Dobrava病毒（Ⅵ型）、Thottapalaym病毒（Ⅶ型）以及1993年在美國西南部暴發的漢坦病毒肺症候群的病原。其中前4型經世界衛生組織漢坦病毒參考中心認定的，而後4型則尚未最後認定。從我國不同疫區、不同動物及病人分離出的HFRS病毒，分屬於Ⅰ型和Ⅱ型，兩型病毒的抗原性有交叉。

（四）抵抗力

HFRS病毒抵抗力強。對酸（pH3）和丙酮、氯仿、乙醚等脂溶劑敏感。一般消毒劑如來蘇爾、新潔爾滅等也能滅活病毒。病毒對熱的抵抗力較弱，56～60℃30分鐘可滅活病毒。紫外線照射（50cm、30分鐘）也可滅活病毒。

二、致病性與免疫性

（一）流行特點

目前世界上已發現能攜帶本病毒的鼠類等動物百餘種，疫源地遍及世界五大洲。在亞洲、歐洲、非洲和美洲28個國家有病例報告。我國是HFRS疫情最嚴重的國家，自本世紀30年代首先在黑龍江省孫吳縣發現此病後，疫區逐漸擴大，現已波及二十八個省、市、自治區。自80年代中期以來，年發病人數超過10萬，病死率為3～5%，有的地區高達10%。

黑線姬鼠和褐家鼠是我國各疫區HFRS病毒的主要宿主動物和傳染源。此病有明顯的地區性和季節性，這種地區性和季節性與鼠類的分布與活動有關。Ⅰ型HFRS發病多集於秋冬之間，Ⅱ型則多集中於春夏之間。HFRS的傳播途徑尚未完全肯定，認為可能的途徑有3類5種，即動物源性傳播（包括通過呼吸道、消化道和傷口3種途徑）、蟲媒傳播和垂直傳播。其中傳播源性傳播是主要的傳播途徑，即攜帶病毒的動物通過唾液、尿、糞排出病毒污染環境，人或動物通過呼吸道、消化道攝入或直接接觸感染動物受到傳染。蟎類也可能是一病的傳播媒介。

（二）致病性

潛伏期一般為兩周左右，起病急，發展快。典型病例具有三大主症，即發熱、出血和腎臟損害。臨床經過分為發熱期、低血壓休克期、水尿期、多尿期和恢復期。HFRS的發病機理很複雜，有些環節尚未完全搞清。目前一般認為病毒直接作用是發病的始動環節，而免疫病理損傷也起重要作用。病毒感染造成病毒血症以及全身毛細血管和小血管損傷，引起高熱、寒戰、乏力、全身酸痛、皮膚和粘膜出現出血點或出血斑，重者還可有腔道或各臟器出血、腎臟損害出現血尿、蛋白尿，電解質紊亂。廣泛的毛細血管和小血管損傷引起的出血、血漿滲出和微循環障礙等造成低血壓或休克。病程早期血液中lgE水平增高，提示Ⅰ型變態反應可能通過血管活性物質的作用，使小血管擴張，滲出增加。另外在早期病人體內即可出現大量循環免疫複合物，在血管壁、血小板、腎小球及腎小管上有免疫複合物沉積，血清補體水平下降；血清中也可檢出抗基底膜和抗心肌抗體，這些現象表明Ⅲ型和Ⅱ型變態反應造成的免疫病理損傷也參與了HFRS的致病。

（三）免疫性

人對HFRS病毒普遍易感。過去認為HFRS以顯性感染為主，但近年來的監測研究表明，人群感染後僅少數人發病，大部分人呈隱性感染狀態，特別是Ⅱ型疫區的人群隱性感染率更高。感染後抗體出現早，發熱1～2天即可檢測出lgM抗體，第7～10天達高峰；第2～3天可檢測出lgG抗體，第14～20天達高峰，lgG抗體在體內可持續存在30餘年。近年來的研究結果表明，在不同的抗體成份中，對機體起免疫保護作用的主要是由G1和G2糖蛋白刺激產生的中和抗體和血凝抑制抗體，而由N蛋白刺激產生的特異性抗體在免疫保護中也起一定作用。

以往曾認為HFRS病人的細胞免疫功能呈抑制狀態，而近年來的研究表明，細胞免疫在對HFRS病毒感染的免疫保護中起同樣起重要作用。特別是觀察到HFRS病人的抑制性T細胞功能低下，致使殺死性T細胞和B細胞功能相對增強，一些細胞因子（如白細胞介素1、干擾素、腫瘤壞死因子、白細胞介素2受體、前裂腺素E2等）的水平在HFRS的不同病期也有明顯變化。值得指出的是，上述細胸免疫（包括一些細胞因子）與特異性抗體一樣，除參與抗感染免疫，具有抵禦和清除病毒的作用以外，也參與變態反應，即也可能是造成本病免疫病理捐贈傷的原因之一。

HFRS病後可獲持久免疫力，一般不發生再次感染髮病，但隱性感染產生的免疫力多不能持久。

三、微生物學診斷

（一）病毒分離

病人急性期血液、屍檢組織或感染動物的肺、腎等組織均可用於病毒分離，組織需研磨成懸液。常用Vero-E6細胞分離培養，培養7～14天後，用免疫熒光染色法檢查細胞內是否有病毒抗原，胞漿內出現黃綠色顆粒熒光為陽性。也可取檢材接種易感動物來分離病毒，常用者為小白鼠乳鼠，通過腹腔或腦內接種，接種後逐日觀察動物有無發病或死亡，並定期取動物腦、肺等組織，冰凍切片或將組織研磨成懸液後分別用免疫熒光法或ELISA檢查是否有病毒抗原。用細胞或動物分離培養陰性者繼續盲傳，連續三代陰性者方能肯定為陽性。此外在進行動物實驗時採取嚴格的隔離及防護措施，以防止發生實驗室感染。

（二）血清學檢查

1．檢測特異性lgM 抗體：此抗體在發病後第1～2天即可檢出，急性期陽性率可達95%以上，因此檢測此抗體具有早期診斷價值。根據情況可選用間接免疫熒光法（IFAT）和ELISA，後者又可分為lgM捕捉法和間接法，其中以lgM捕捉法的敏感性和特異性為最好。

2．檢測特異性lgG抗體：病後特異性lgg 抗體出現較早，維持時間很長，因此需檢測雙份血清（間隔至少一周），恢復期血清抗體滴度比急性期升高4倍以上可確診。常用檢測方法為IFAT和ELISA。此兩種方法還可用於血清流行病學調查。

3．檢測血凝抑制抗體：採用血凝抑制試驗檢測病人血清中的特異性血凝抑制抗體，在輔助診斷和流行病學調查中也較常用。