基礎檢驗學/尿試帶試驗方法

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1.尿PH檢查:結果有二重含義:①反映體內酸鹼代謝狀態;②由於尿蛋白、尿比密的測定原理是基於膜尬上最後PH試劑的顏色變化,因此分析PH變化還有監控尿PH變化對其它膜尬區反應的干擾作用。

2.尿比密檢查:尿比密測定曾採用懸浮法和折射儀法,主要測定尿內固體物濃度隨著10項尿液分析儀的問世,試帶法測定尿比密得到廣泛使用,其膜塊中主要含有多聚電解質(甲乙烯酸醯馬不酐)、酸鹼指示劑及緩衝物,這是採用酸磚瓦指示劑法,其原時是根據經過多聚電解質的Pka改變與尿液離子濃度相關原理。麻劑條中的多聚電解質含有隨尿標本中離大濃度則解離的酸性基團,離子越多,酸性基團解離子越多,而使膜尬中的PH改變,這種改變可由膜塊中的酸鹼性指示劑的顏色變化顯示出來,進而換算成尿液的比密值。

不同的干擾因素對上述三種方法的測量的比密結果影響也不同:第一是尿液中的非離子化合物增多時,可使懸浮法和折射儀法測得的比密結果偏高,而試帶法只與離子濃度有關,不受其影響;第二是尿液中蛋白增多時,三種方法都具有不同程度的增高,以試帶法最為明顯,折射儀法次之;第三是試帶法易受PH的影響,當尿液的PH>7時應在測定結果的基礎是增加0.005作為由於尿液PH損失的補償。

尿試帶法簡單、快速、用尿量少,但由於試紙法尿比密結果間隔較大,不能反應細微的比密變化,故不能用於濃縮稀釋試驗。加外試帶法對高或過低的尿比密均有敏感,故不宜用於這兩種情況,如新生兒尿就不適用。因此只能用於一般性篩選,在上述情況下以折射儀更為理想。NCCLS建議折射儀結果作為干試帶法的參比方法。

3.尿蛋白檢查尿液分析儀尿蛋白測定是根據指示劑蛋白誤差原理,膜塊中主要含有酸鹼性指示劑棗溴酚蘭、枸櫞酸緩衝系統和表南的活性劑。在PH3.2時,溴酚產生的陰離子,與帶陽離子的蛋白質白蛋白)結合後發生顏色變化。

化學法測定尿蛋白操作簡單快速,但在使用應注意:①病人服用奎寧磺胺嘧啶等藥物引起的強鹼性尿時,會使干化學法出現假陽性結果而磺基水楊酸法出南假陰性結果.可用稀乙酸將尿液PH調5-7,再行實驗,藉以區別是否由於強鹼性尿而導致假陽性.②研究證明幾十種藥物可使尿蛋白檢查出現假陽性,有學者對用大劑量青黴素患者給藥前後進行了尿蛋白的檢測,結果表明:滴注250萬單位組2小時/320萬單位3組小時,480萬單位組5小時可能對磺基水楊酸法產生假陽性,對干化學法產生假陰性。③不同測定方法對病人尿液內不同種類蛋白質檢測的敏感不同,雙縮脲定量可以對白蛋白,球蛋白顯赤似的敏感性,而干化學測量球蛋白的敏感性僅是白蛋白的1/100-1/50。因此對於腎病患者特別是在疾病發展過種中需在系統觀察尿蛋白含量的病例應使用磺基水楊酸法(或加熱乙酸法)定性和雙縮脲法進行定量試驗。④標本內含有其它分泌物(如生殖系統分泌物)或含有較多細胞成分時,可引起假陽性。

NCCLS建議以磺基水楊權法作為干化學檢測尿蛋白的參比方法。

4.尿葡萄糖測定:尿試帶法測定尿葡萄糖是採用酶法。其膜塊中含有葡萄糖氧化酶過氧化物酶和色原。不同廠家採用的色源有異主要有二類:①採用碘化鉀做色原,陽性反應呈紅色;②採用鄰甲聯苯胺作色原,陽性反應呈藍色。其測定原量是葡萄糖氧化酶把葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸過氧化氫,後者再由過氧化物酶催化釋放出[0],而使色原呈顏色,以此類方法最常用。

尿試帶法在使用中應注意:①尿試帶法與班氏定性法的特異性不同前者的特異性強,吸與葡萄糖反應;而後者與尿內反有不原性糖和所有還原性物質都反應,故在尿試帶法呈陰性的標本有可能在班氏法呈陽性結果;②干化學法與班氏法的靈敏度不同,干化學法的靈敏度高,葡萄糖含量為1.67-2.78mmol/L時即可出現弱陽性;而班氏法8.33mmol/L才呈弱陽性表現;③干擾物質對兩法的影響不同:尿液內含有對氧親和力較強的還原物質可與班氏法中的銅離子作用產生假陽性,但卻可使干化學法試帶產生的H2O2還原顯色而使其成假陰性。排除的方法是先將尿液煮沸幾分鐘破壞維生素C再進行實驗。現已有含維生素C氧化酶的試帶的可以排除這一干擾。④干化學法測定尿葡萄糖只是一般的半定量試驗,它所設計的濃度水平與傳統的班氏存在的著差異,二者有可相互比;;交,因此對於糖尿病的動態觀察,在干化學出現陽性結果時,最好用濕化學定量方法,以確立準確的尿葡萄糖範圍或收集晝夜尿標本作尿糖定量。

5.尿酮體檢查:檢測尿酮體的膜塊中主要含有亞硝基鐵氰化鈉,或與尿液中的乙醯乙酸丙酮主生紫色反應。其對乙醯乙酸的敏感性為50-100mg/L對丙酮則為400-700mg/L,不與β-羥丁酸起反應。

在使用中就注意:①由於尿酮體中的丙酮和乙醯乙酸都具有揮發性,醯乙酸更易受熱妥解成丙酮;尿液被細菌污染後,酮體消失,因此尿液必須新鮮,及時送檢,以免因酮體的揮發或分解出現假陰性結果或結果偏低;②干學法與酮體粉法靈敏度存在差異:酮體粉法對乙醯乙酸與丙酮的敏感性分別為80mg/L和100mg/L。不如試帶法敏感,故同一病理標本兩面種方法可能出現結果的差異,分析結果時應特別注意;③不同病因引起的酮症,酮體的成分不同,即使一病人不同病程也可有差異,例如在糖尿病酮症酸中毒早期病命名中,主要酮體成分β羥丁酸,很少或缺乏乙醯乙酸,此時測得結果可導致對總酮體量估計不足。在糖尿病酮症酸中毒症状緩解之後,β-羥丁酸轉變為乙醯乙酸,反而使乙醯乙酸含量比初始急性期增高,易對病情估計過重。因此檢驗人員必須注意病程發展,與臨床醫生共同分析實驗結果。

6.尿膽紅素、尿膽原檢查:尿膽紅素測定原理是結合膽紅質在強酸性介質中,與2,4-二氯苯重氮鹽偶聯反應呈紫紅色;測定尿膽原的原理與改良Ehrlich法相同。

兩個方法主要注意點為:①標本必須新鮮,以免膽紅素在陽光照射下成為膽綠素;尿膽原在氧化成尿膽素。②尿液中含高濃度維生素C和亞硝酸鹽時,抑制偶氮反應使尿膽紅素呈假陰性。當患者接受大量的氯丙嗪治療或尿中含有鹽酸苯偶氮吡啶的代謝產生時,可呈假陽性。③尿液中一些內源物質如膽色素原、吲哚、膽紅素等可使尿膽原檢查結果出現陽性,一些藥物也可產色干擾實驗。④正常人尿膽原排出理每天波動很大,夜間和上午量少,午後則迅速增加,在午後2-4時達最高峰;同時尿膽原的清除率與尿PH相關,PH5.0時,清除率為2ml/min;Ph8.0時增加至25ml/min,因此有學者倡用預先給予患者服用碳酸氨鈉,以鹼化尿液慢集午後2-4時尿(2小時排出量)進行測定,以提高檢出率。

7.尿亞硝酸鹽檢查:膜塊中主要含有對氨基苯砷酸和1,2,3,4-四羥基對苯喹啉-3酚。大多當數尿路感染大腸埃希菌引起的,正常人尿液中含有來自食物或蛋白質代謝產生的硝酸鹽,池尿液中有大腸埃希菌感染增殖時,將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,可將膜塊中對氨基礎苯砷酸重氮化而成重氮鹽,後者與1,2,3,4-四羥基對苯喹啉-3鞭偶聯使膜塊產生紅色,藉以診斷患者是否被大腸埃希菌感染,其檢出敏感度為0.03-0.06g/l 。尿液中亞硝酸鹽檢出率受感染細菌是否含有硝酸鹽還原酶,食物中是否含有選題的硝酸鹽、尿液標本是否在膀胱停留4小時以上三者影響,符合上述三個條件,此試驗的檢出率為80%,反之可呈現陰性結果。因此本試驗陰性關不能排除細菌尿的可能,以樣亞硝酸鹽試驗陽性也不能完全肯定泌尿系統感染,標本放置過久或污染可呈假陽性,應結合其它尿液分析結果,綜合分析得出正確的判斷。

8.尿白細胞檢查:尿試帶法檢查尿內白細胞的原理基於中性粒細胞胞質內含有特異性酯酶,可或作用於膜塊中的吲哚酚酯,關與重氮鹽反應形成紫色縮合物,其顏色深淺與中性粒細胞的多少呈正比例關係。操作時應注意:①尿液標本必須新鮮,留尿後應立即測定,以免白細胞契壞,導致干化學法與鏡檢法人為的實驗誤差;②此法只能測中性粒細胞,不與單核細胞淋巴細胞反應,在腎移植病人發生排異反應時,尿中的以滿面春風巴細胞為主的或其它病因引起的單核細胞尿時會產生陰性結果;③尿液中污染甲醛或含有高濃度膽紅素或使用某些藥物時,吉產生假陽性;尿蛋白>5g/L或尿液中含有大劑量先鋒黴素等紅物時,可便結果偏低或出現假性結果。

由於尿液分析儀白細胞檢測與顯微鏡下計數實驗原理截然不同,其報告方式也是兩種不同的概念,很難找出兩者的對應關係,迄今還沒有一種直接的換算方式,因此儀器法白細胞檢查只是一個篩選試驗,絕不可代替顯微鏡檢查。

9.尿血紅蛋白、尿紅細胞檢查:膜塊中主要含有過氧化氫茄香素或過氧化氫烯鈷和色原(如鄰甲聯苯胺)兩種物質。其原理為尿液中紅細胞內的血紅蛋白或其破壞釋放出的血紅蛋白均具有過氧化氫酶樣活性,可使過氧化氫茄香素或過氧化氫烯鈷分解出[0],後者能氧化有關色原(如鄰甲聯苯胺)使之呈色。

尿試帶法檢查尿內紅操作時應注意:①因為不同廠家或不同型號的試劑帶敏感度不同,使用時必須注意批間差;②干化學法既可與完整的紅細胞反革命應又能測定游離的血紅蛋白量,因此報告時要了解臨床診斷,綜合分析。由於腎病患者終尿中的紅細胞可因各種因素變形裂解使血紅蛋白逸出,可導致儀器法與水測法的差異;③尿中含有的易熱酶、肌紅蛋白菌尿可引起假陽性;④大量維生素C可干擾試驗結果,使某些試帶產生假陰性,應予以警惕。

32 尿液分析儀原理 | 干化學檢查與顯微鏡檢查 32
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