基礎檢驗學/支氣管肺泡灌洗液檢查
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痰液檢查雖可對呼吸道疾病的診斷提供幫助,但不夠靈敏與特異且對疾病定位幫助不大。支氣管肺泡灌洗術(bronchoalceolar lavage,BAL)中在纖維支氣管鏡基礎上發展起來的一項新技術。BAL是應用纖維支氣管鏡進行支氣管肺泡灌洗,採取肺泡表面襯液進行炎症與免疫細胞及可溶性物質檢查的方法。與支氣管沖洗少量液體注入支氣管信灌注大量的液體進行支氣管肺泡灌洗不同,利用支氣管肺泡灌洗液進行細胞學、微生物學、寄生蟲學和免疫學等方面的各項檢驗,對一些下呼吸道疾病和診斷、病情觀察和預後判斷開闢了一條新途徑。
支氣管肺泡灌洗術分全肺灌洗和肺段亞肺段灌洗。前者多用於治療,後者多用於採集檢驗標本。
一、標本採集和處理
通常於局部麻醉後將纖維支氣管鏡插入右肺中葉或左肺舌段的支氣管,將其項端契入支氣管分支開口,經氣管活檢孔緩緩少入37攝氏度滅菌生理鹽水,每次-50毫升,總量100-250毫升,不應超過300毫升。每次注液後以-13.3~-19.95kpa負壓吸出,要防止負壓過大,過猛。分別收集於用矽油處理進的容器中,容器周圍宜用冰塊包圍,並及時送檢。記錄回收液量,至少應回收30-40%以上,BALF方能進行分析。分別注入的液體每次回收後混合一起進行試驗。第一份回收的標本往往混支氣管內成分,為防止其干擾,也可將第一份標本與其它標本分開檢查。首先用單層紗布過濾以除去粘液,將濾液離心後分離上清液供生化檢查和免疫學測定,沉澱物供細胞檢查。微生物學檢查的標本須嚴格遵守無菌操作;合適的BALF應要求:①達到規定的回收比例;②不混有血液,紅細胞數小於10%;③不應混有多量的上皮細胞(一般小於3%)。
二、細胞學檢查
1.有核細胞計數和分類計數:計數除上皮細胞及紅細胞以外的所有細胞,經每毫升回收液的細胞總數表示。細胞分類可用沉澱物制定塗片或用細胞離心器進行,正常非吸煙者BALF細胞數見表13-1,正常人的BALF含有核細胞為(5-10)×106/L。
2.淋巴細胞亞群分析:BALF中淋巴細胞增多,可用單株抗體進行淋巴細胞亞群分析。例如CD3、CD4、CD8、HLA-DR等以有助於發病機制的研究。正常人非吸煙者BALF中淋巴細胞表面抗原表型見表13-2。
3.癌細胞:支氣管肺癌患者的BALF沉澱物檢出癌細胞,有助於肺癌診斷。
表13-1 正常非吸煙者BALF細胞
作者 | 年 | 例數 | 注入量 | 回收量(%) | 總細胞數(×106) | 細胞(×106/ml) | Mac | Lym | Neut | Eos |
Hunninghske | 1983 | 8 | 100 | 52 | 14.0 | 26.9 | 93 | 7 | 0 | 0 |
北醫大三院 | 1987 | 10 | 150 | 62 | 13.4 | 14.7 | 86 | 13 | 0.9 | 0.05 |
Ettensohn | 1988 | 78 | 120 | 63 | 7.3 | 9.4 | 95 | 4 | 1 | 0 |
註:Mac巨噬細胞;Lym淋巴細胞;Nuet 中性粒細胞;Eos 噬酸性細胞
表13-2 正常非吸煙者BALF中淋巴細胞表面抗原表型
作者 | 年 | 例數 | 淋巴細胞(%) | 總-?/FONT>T | TH | TS | h :S | b 細胞 |
Yamada | 1986 | 25 | 13.8 | 63.0 | 45.4 | 25.3 | 1.90 | 5.3 |
Wallaert | 1987 | 12 | 7.7 | 66.4 | 48.4 | 27.5 | 1.8 | ?/FONT> |
三、可溶性物質檢查
BALF離心液的上清液中含有複雜的可溶性成份,例如各種蛋質、酶類、脂類等(表13-3)。這些成分的來源有:①被動漏出者(如白蛋白、血清類粘蛋白);②主動轉運者;③局部產生分泌成分。這些物質反映肺泡表面襯液成份,其測定對了解某些肺部疾病的病變特徵,研究發病機制提供重要手段。
表13-3 BALF檢測的可溶性物質
溶質 | 濃度近似值 | 溶質 | 濃度近似值 |
總蛋白 | 70μg/ml | 纖維連接蛋白 | 30-150ng/ml |
白蛋白 | 70μg/ml | 白細胞彈性蛋白酶 | + |
免疫球蛋白 | 膠原酶 | + | |
IGG | 2.5-10μg/ml | 血管緊張素轉換酶 | + |
IGA | 2.5-6μg/ml | 極性脂質 | 78μg/ml |
IGM | 100ng/ml | 非極性脂質 | 45μg/ml |
IGE | 0.06-0.3μg/ml | 前列腺素E | 200-2000pg/ml |
α1-抗胰α蛋白酶 | 1-2μg/ml | 血栓素B | 25-85pg/ml |
α2-巨球蛋白 | 0.04μg/ml | ||
癌胚抗原 | 0.8ng/ml | ||
轉鐵蛋白 | 4μg/ml |
四、微生物學檢查
1.塗片BALF不像痰液那樣易受上呼吸道雜菌的污染,也不含氣管和左右大支氣利害的分泌物,含非病原性阿菌很少,故其塗片檢菌的意義較大。取BALF沉澱物進行本蘭氏染色與抗酸染色檢查,對結核分支桿菌的檢查有較大意義。
2.培養:嚴格無菌操作采BALF進行增菌培養或取其沉澱物直接分離培養,是檢查支氣管和肺部感染的重要方法,不僅適用於對細菌和真菌等檢查,也適用於對支原體的培養和病毒分離,當培養的細菌為105CGU/ml時被認為有診斷意義。但標本採集方法複雜。
五、寄生蟲學檢查
1.卡氏肺孢子蟲:人類一般受感染後多無明顯症状。但若患者的免疫功能低下,特別是AIDS患者和大量使用免疫抑制劑的患者易受感染,並可引起嚴重的間質性肺炎。於患者痰中不易查到寄生蟲,而BALF沉澱物檢出的陽性率較高。
2.衛氏並殖吸蟲卵:輕型肺吸蟲病患者痰中可能查不到蟲卵,而可從BALF沉澱物中查到。
除以上各項檢查外,還可檢查BALf 中有無其它異特。若在BALf 沉澱物中查到石棉小體,有助石棉肺的診斷。
六、臨床應用
由於BAl 能獲取肺泡表面襯液,因此對其內容物的檢查有助於肺部疾病的診斷、治療、預後判斷及發病機制研究。其應用範圍越來越廣,此處釵做重點介紹:
1.肺部感染的病原學診斷:BAL檢查在下呼吸道感染的檢查中佔有重要的地位。BAL可以收集較大範圍肺實質的肺泡表面襯液標本,可進行原蟲、病毒及細菌學等檢查。對於普通細菌感染者其細菌培養大於等於105cfu/ml時為確定感染的閾值。但對於某些特殊感染,如在BALF中分離出結核分支杆菌、軍團菌即可做出診斷。BALF對免疫功能低下合併肺感染的診斷也很有幫助,如對巨細胞病毒感染的敏感性達96%,對肺孢子蟲的感染敏感性為85-90%。
2.BALf 檢查:診斷呼吸道原發性或繼發性惡性腫瘤有較好效果,也包括周圍性肺癌、瀰漫性肺惡性腫瘤(如支氣管肺泡癌)、小細胞肺癌等。但BALF檢查結果受癌類型和腫瘤大小的影響,以腺癌和肺泡癌陽性率最高。
3.對間質肺疾病的診斷、治療評價及預後提供幫助
(1)外源性變應性肺泡炎:急性期BALF細胞總數明顯增加,達對照組4倍。急性期早期肥大細胞增多,恢復後降至正常。淋巴細胞亦明顯增多,其亞群以CD8+增多為主,CD4/CD8比值降低,CD57+和CD16+也增加。臨床上認為BAl 是外源性變應性肺泡炎最敏感的檢測手段。優於X線胸片及肺功能檢查。
(2)結節病:BALF細胞總數增高,主要為T細胞增多,以CD4+為主。CD4/CD8比值明顯增高,這些變化有重要的診斷意義。中性粒細胞和肥大細胞的增多預示病人閏變的有可能發展為纖維化。
(3)特發性肺間質纖維化:BALF中主要為中性粒細胞增多,嗜酸性粒細胞也可能增加,據此與以淋巴細胞增多為主的其它崩牙腫肺疾病鑒別。
BAL做為一種特殊的檢查方法對某些其它肺疾患如支氣管哮喘,成人呼吸窘迫症候群、瀰漫性肺出血、肺泡蛋白沉著症(BALF外觀呈乳狀)等的臨床意義也處於研究和觀察之中。
BALF檢查中細胞計數和分類包括T淋巴細胞亞群分類,經過多年的研究已基本標準化了,但對可溶性物質檢查還存在某些問題,主要是灌洗液量與方法不同,對肺襯液稀釋程度影響測定結果,尚須進一步的研究。
BAL應用越來越廣泛,雖然其操作複雜,有上些生理性改變及輕度併發症,但只要選好適應的證,操作正確,還是一種安全有效的檢查方法。進行BAL檢查的禁忌證有:①嚴重的肺功能損害者;②新近發生急性心肌梗死患者;③新近發生大咳血者;④活動性肺結核未經治療者等
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