基礎檢驗學/方法學評價

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臨床基礎檢驗學

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    - 電阻抗法血細胞分析儀測試原理
    - 血細胞分析儀檢測參數的臨床意義
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白細胞計數及分類有兩種方法：一種是顯微目視法，一種是血液分析儀方法。顯微鏡法是基礎，血細胞分析儀在要根據顯微鏡法準確計數結果進行校正後方能使用，但這種計數不同於常規工作進行的白細胞計數，根據統計學研究白細胞計數結果的總變異係數為：

（公式中nb為所見實際數目，nc為用計算盤的次數，np為用吸管的次數）。

在一個標本中，只有使用多支吸管，使用多次（個）計數盤，計數細胞數量達到一定程度時，才能避免細胞在計數盤分布的固有誤差，計數盤和吸管的系統誤差和操作隨機誤差的影響，使計數結果接近真值。一般在進行血細胞分析儀校正時，應使用這種方法。但實常規檢驗中，目視法很難達一上述在求。由於上述各方面誤差的影響，白細胞計數的重複性和準確相對較差。經過嚴格校正的血細胞分析儀，由於計數細胞多，計數的每個步驟都可標準化，便於質量控制（特別是全自動血液分析儀），計數的精確性、準確性均較高（CV可在2%以下）。這一點在紅細胞計數和血小板計數時也是相似的。

儀器法白細胞分類有兩大類：一類是電阻抗法，這類儀器是根據溶血劑作用後的白細胞大小，人為地分成幾個部分，顯然這種分類是不夠準確的。另一類是利物用各種高科技技術聯合對同一白細胞的體積、細胞核形狀及胞質中顆粒進行檢測，綜合分析後，進行細胞分類。這種多方位檢測分類法，可較準確地進行白細胞分類，但仍不能準確地檢查白細胞形態的病理變化，特別是對幼稚白細胞的檢測。因此必須強調，儀器法白細胞分類計數，只能提供正常血液標本（血紅蛋白、白細胞數、血小板數均正常）中各種白細胞數目的大致分布情況或為常規工作進一步鏡檢提供篩選的信息，而決定不能完全代替油浸顯微鏡下進行的白細胞分燈檢查，另外由於目視法與儀器法實驗方法的不同，且全自動力血液分析儀多使用靜脈血檢測，儀器法測定值的參考範圍與傳統使用的目視法的參考值有所差異，表2-6是近年來國內外文獻介紹的靜脈血全自動血細胞公析儀的正常參考範圍。

表2-6（1）血細胞分析儀檢測靜脈血各項參數胡考值

	WBC（10⁹/L）	WCV（FL）	WCH（pg）	WCHC（g/l）	RDW（%）PLT（10⁹/L）
	男女	男女	男女	男女	RDW（%）PLT（10⁹/L）
周子秋（台灣1993）	3.9～9.7 3.5～9.1	83～101 80～101	28.2～34.7 26.4～34.3	31.8～36.4 31.3～36.1
Williams(紐約1995)	4.4～11.3	80～96.1	27.5～33.5	334～355	11.5～14.5172～450
叢玉隆等（北京1996）	3.48～9.48	80～98	27.2～34.3	320～360	10.9～15.398.7～302.9
Bassman	3.7～8.5	81～100	27～31.2	318～354	12.4～14.8142～424

表2-6（2）血細胞分析儀檢測靜脈血各項參數參考值［續表（1）］

	RBC（10¹²/L）			Hb(g/L)		Hct
	男	女		男	女	男	女
周子秋	4.5～5.7	3.8～5.1		135～170	115～150	0.40～0.51	0.345～0.44
Williams	4.5～5.9		4.1～5.1	140～175	123～153	0.42～0.50	0.36～0.45
叢玉隆等	4.3～5.86		3.77～5.17	137～139	116～155	0.40～0.517	0.367～0.467
Bassman	4.7～6.13			141～181		0.437～0.583

1）摘自：周子秋主編，實用臨床檢查，1993

2）摘自：Williams 主編，hematology，第15版，1995

3）摘自：北京市成人靜脈血正常參考值調查，中華醫學檢驗雜誌，1996（3）

4）摘自：Bassmen主編， Automateb BloocBlood Countw and Differentials，1986

雖然血液分析儀提高了實驗結果的精確性和準確性，但先進的儀器應用，必須有一套全面質量管理措施，性質在有高素質的技術人員。這方面包括：

1．操作人員上崗前的培訓

（1）上崗前在接受良好的培訓。要對儀器的原理、操作規程、使用注意事項、異常報警的含義、引起實驗誤差的因素及如何維護要有充分的了解，掌握ICSH推薦的標準方法校正儀器的每一個測試參數的程序。

（2）注意在分析前、中、後每一步的質量控制，注意病人生理或病理因素給實驗造成的誤差或服用藥物的干擾作用。隨時監控儀器的工作狀態，注意工作環境的電壓變化和磁場、聲的干擾。根據質控圖的變化及時進行儀器的調試，測試後要根據臨床診斷、直方圖變化、各項參數的關係，確認無誤後方能發出報告。

2．儀器的鑒定：新儀器安裝後，或每次維修後，必須對儀器的技術性能進行測試和評價，這對保證檢驗質理將起到重要作用。ICSH公布了對電子血球計數儀的評價方案。在細胞計數和血紅蛋白測定方面在鑒定儀器測試杯本的總變異、攜帶污染率、線性範圍、可比性和準確性。一般而言，白細胞計數總變異在3%以睛，攜帶污染率小於2%，線性範圍較寬，重複性小於3%時，可滿足臨床測試需在。在電阻抗法白細胞分類部分應注意細胞分類結果的重複性，與顯微鏡檢查的相關程度及能否在直方圖顯示血液中存在一定數量異常細胞等。

3．儀器的校正：儀器經鑒定全格且，需要進一步校正，校正方法根據不同儀器的要求進行。校正時最好使用經參考（此儀器已用國際參考方法校正）標定的新鮮血液。在無參考儀器的單位，應用嚴格手工法得出各項參數值後，進行儀器校正。

4．標本的採集和運送：全自動血細胞分析儀一般在求用抗凝的靜脈血，儘可能不用皮膚穿刺采血，因為不同部位皮膚穿刺血的細胞成分和細胞與血漿的比例常不一致與靜脈血的差別則更大，從技術角度講，毛細管采血時較少，特別對一些全自動的儀器，不易採到足夠量血，更不能在有疑問時重複檢查。因此除少數不易取得靜脈血，如嬰兒、大面積燒傷及某些需要經黨采血檢查的病例（如血液病、腫瘤化療等）外，均就用靜脈血做實驗。使用半自動血液分析儀時也可用手指血進行。

上述抗凝血在室濕下，WBC、RBC、PLT可穩定24h，白細胞分類可穩定6-8h，血紅蛋白可穩定數日。但鏡下白細胞分類，2小時後粒細胞形態即有變化，故需作鏡檢下分類者，應及早推制血片。雖然4⁰C條件可延長血液貯存期，但血小板不宜在低溫下貯存，因會影響PLt MPV值，故如不能及時檢查時，血液應在室溫保存。

5．操作有員在分析中應注意的幾個問題

（1）測試時試劑的溫度對結果的影響：血液分析儀細胞計數最適溫度為18-22⁰C，低於15⁰C，高於30⁰C抱歉對結果有影響。其原因可能是由於溫度不同，致使細胞體積發生變化，而影響體積的測量，進而改變細胞粘度分布曲線，影響細胞計數。

（2）溶血劑的用量及溶血時間，對血小板、白細胞計數影響：全自動俯器由於在機內自動加溶血劑並定時檢測可避免其影響，但使用半自動儀器進行血細胞計數時，是要血液預稀釋後加入溶血劑，溶血後進行血細胞計數和分類計數，因此溶血劑量及溶血的時間至關重要。加溶血劑的量不同或加後放置時間過短，以致使溶血不完全；或放置時間太久使白細胞明顯變形（阻抗法儀器分類是以白細胞體積作為分群依據的，加溶血劑後白細胞膜溶解，胞質大部分溢出，整個細胞體積縮小，僅留下核和部分顆粒），均可導致計數誤差，甚至用儀器不能進行分群計數。

（3）儀器的半堵孔現象：根據檢測器上微孔堵塞的程度，通常將其分為完全堵孔和不完全堵孔兩種。如發生完全堵孔，血細胞不能通過微孔計數，也不顯示結果，有的儀器還同時在螢幕上顯示clog，所以完全堵孔很容易判斷。不完全堵孔主要通過下述方法判斷：①觀察計數時間；②觀察示波動器波形；③看計數批示燈閃動，如該燈閃動無規律常是不完全堵孔表現。

（4）病理因素對血液分析儀使用的影響：①由於多發性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系統增殖性疾病、轉移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血栓疾病、溏尿病病人血中存在有冷纖維蛋白等，均可導致血液中某些物質凝集，致使血細胞計數增高。此時將稀釋標本放在37⁰C水浴10分鐘後立即計數可消除此影響；②血液中白細胞顯著增高而影響紅細胞計數劃有核紅細胞出現而影響白細胞計數；③低色素必貧血或紅細胞內含大量sHb或HbCO而抵抗溶血劑作用時，紅細胞溶解不完全；④某些新生兒或某些肝病病人紅細胞膜質類異常，抗溶血劑作用，導致紅細胞溶血劑不完全；⑤多發性骨髓瘤的M蛋白增多時，Ph低的情況下，M蛋白可與溶血劑發生反應而使結果偏高；⑥各種病順引起的血栓前狀態使血小板易於聚集，機時影響結果。

6．分析後注意事項

（1）根據直方圖及參考數變化確定計數結果是否準確及是否需要顯微鏡檢查：前已述及，標本中出現小的凝塊或血小板聚集時可影響白細胞、紅細胞及血小板計數。這些影響可在直方圖中顯示出來，因此在發生白細胞分燈的結果吸是在正常人體格檢查世界形勢血液檢查務項參數均正常時，作為白細胞分類的參考。

（2）分析實驗結果各參數之間的關係：實驗結果的各項的胡數之間有內在聯繫，比如RBC、HCT（紅細胞壓積）與MCV；HB、RBC與MCH之間，又如RDW與塗片的紅細胞形態變化之間，都有明顯的相關關係。加外還可以分析實驗結果與臨床資料的相關關係，相關檢查對於實驗中出現的未預料的結果，是否可以從臨床角度加以解釋，或是否與其它實驗有關的分析均十妥重要，例如Hb值過高或過低，是否可用輸血、大量失水或出血、溶血來解釋。此外，MCHC的高或低與瑞特染色的血片上紅細胞中血紅蛋白量情況是否一致；白細胞與血小板計數值是否與血片上白細胞、血小板公布情況相一致等相互參照，對保證質量均有重要價值。

（3）定期徵求臨床醫護人員對本室結果的評價：臨床醫生對實驗結果的評價也是質理控制的重要環節，臨床醫生最熟悉病人的病情變化和疾病的發展過程，實驗數據是否符合臨床也是衡量結果正確與否的重要依據之一，因此，實驗室要經常定期聽取臨床醫生的意見，以不斷改進實驗室的工作。