組織學/原位雜交術

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組織學

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原位雜交術（in situ hybridization）是一種核酸分子雜交技術，它是通過檢測細胞內mRNA和DNA序列片段，原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基

大鼠肝大部切除後再生過程中增殖期肝細胞

圖1－11 大鼠肝大部切除後再生過程中增殖期肝細胞

攝取³H標記的胸腺嘧啶核苷放射自顯影像

↑ 增殖期肝細胞核

因表達。其基本原理是根據兩條單鏈核苷酸互補鹼基序列專一配對的特點，應用已知鹼基序列並具有標記物的RNA或DNA片段即核酸探針（probe），與組織切片或細胞內的待測核酸（RNA或DNA片段）進行雜交，通過標記物的顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位。此項技術需首先製備某種核酸探針，其種類主要有三種：①利用大肝桿菌重組帶有目的基因的質體DNA，製成互補DNA探針(cDNA);②應用限制性核酸內切酶消化製成線性DNA模板，在體外轉錄獲得反意RNA探針(cDNA);③依照待測核酸的核苷酸序列，應用DNA合成儀合成寡聚核苷酸探針。cRNA和cDNA的常用標記物有³²S、³²P、³H等放射性核素和熒光素、生物素、地高辛等非放射性物質。組織學應用的原位雜交術主要是染色體原位雜交和細胞原位雜交。前者是研究遺傳基因、抗原基因、受體基因、癌基因等在染色體上的定位與表達；後者是研究細胞某種蛋白質的基因轉錄物mRNA在胞質內的定位與表達（圖1－7，1－12）。核酸分子雜交術有很高的敏感性和特異性，它是免疫細胞化學的基礎上，進一步從分子水平探討細胞功能的表達及其調節機制的，已成為當前細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。