熒光素

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熒光素是具有光致熒光特性的染料,熒光染料種類很多  

目錄

種類

目前常用於標記抗體的熒光素有以下幾種。  

異硫氰酸熒光素

(fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC純品為黃色或橙黃色結晶粉末,易溶於水和酒精溶劑。有兩種異構體,其中異構體Ⅰ型在效率、穩定性與蛋白質結合力等方面都更優良。FITC分子量為389.4,最大吸收光波長為490~495nm,最大發射光波長為520~530nm,呈現明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗乾燥處可保存多年,是目前應用最廣泛的熒光素。其主要優點是人眼對黃綠色較為敏感,通常切片標本中的綠色熒光少於紅色。  

四乙基羅丹明

(rhodamine, RB200) RB200為橘紅色粉末,不溶於水,易溶於酒精和丙酮,性質穩定,可長期保存。最大吸收光波長為 570nm,最大發射光波長為595~600nm,呈現橘紅色熒光。  

四甲基異硫氰酸羅丹明

(tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC) TRITC為羅丹明的衍生物,呈紫紅色粉末,較穩定。最大吸收光波長為 550nm,最大發射光波長為620nm,呈現橙紅色熒光,與FITC的翠綠色熒光對比鮮明,可配合用於雙重標記或對比染色。因其熒光淬滅慢,也可用於單獨標記染色。  

酶作用後產生熒光的物質

某些化合物本身無熒光效應,一旦經酶作用便形成具有強熒光的物質。例如,4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,後者可發出熒光,激發光波長為360nm,發射光波長為450nm。其他如鹼性磷酸酶底物4-甲基傘酮磷酸鹽辣根過氧化物酶的底物對羥基苯乙酸等。 5.鑭系螯合物 某些3價稀土鑭系元素如銪 (Eu3+)、鋱 (Tb3+) 等的螯合物可發射特徵性的熒光,而且激發光波長範圍寬、發射光波長範圍窄、熒光衰變時間長,最適合於時間分辨熒光免疫測定。

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