根據腹痛病史，結合典型體征，白細胞計數及腹部X線檢查等，診斷急性腹膜炎一般並不困難。明確發病原因是診斷急性腹膜炎的重要環節。原發性腹膜炎常發生於兒童呼吸道感染期間、患兒突然腹痛嘔吐、腹瀉並出現明顯的腹部體征。病情發展迅速。而繼發性腹膜炎的病因很多，只要仔細訊問病史結合各項檢查和體征進行綜合分析即可診斷，腹肌的程度並不一定反應腹內病變的嚴重性。例如兒童和老人的腹肌緊張度就不如青壯年顯著；某些疾病如傷寒腸穿孔或應用了腎上腺皮質激素後，腹膜刺激征往往有所減輕。故不能單憑某一項重要體征的有無而下結論，要進行全面分析。若在診斷時須要進一步的輔助檢查。如肛指檢查，盆腔檢查，低半臥位下診斷性腹腔和女性後穹窿穿刺檢查。根據穿刺所得液體顏色，氣味、性質，及塗片鏡檢，或澱粉酶值的定量測定等來判定病因。也可做細菌培養。腹腔抽出的液體大致有透明，混濁、膿性、血性和糞水樣幾種。結核性腹膜炎為草黃色透明之粘性液，上消化道穿孔為黃綠色混濁液含有胃液，膽汁。急性闌尾炎穿孔為稀薄帶有臭味之膿液。而絞窄性腸梗阻腸壞死，可抽出血性異臭之液體。急性出血壞死性胰腺炎可抽出血性液而且胰澱粉酶定量很高。若腹穿為完全之新鮮不凝血則考慮為腹腔內實質性臟器損傷。一般空腔臟器穿孔引起的腹膜炎多是桿菌為主的感染。只有原發性腹膜炎是球菌為主的感染。如果腹腔液體在100ml以下，診斷性腹穿不易成功。為明確診斷，可行診斷性腹腔沖洗，在無菌下注入生理鹽水後再抽出進行肉眼檢查和鏡檢，會給明確診斷提出可靠資料。對病因實在難以確定而又有肯定手術指針的病例，則應儘早進行剖腹探查以便及時發現和處理原發病灶，不應為了等待確定病因而延誤手術時機。
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