層析
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層析(chromatography)，待分離化合物在固定相和流動相間進行分布的技術。易被固定相吸引的成分，其流速較慢；反之易溶於流動相不易進入固定相的成分，其流速較快，因此各待分離物質洗脫時先後有序得以分離。通常將固定相填裝柱中，這稱為層析柱。流動相流經層析柱，分段收集流洗液進行檢測。
1855年，德國F.F.龍格將染料混合物滴於濾紙上，注意到不同顏色環的形成。1897年D.T.戴首先用填充石灰石的層析柱以分段分離粗石油製品。此後，不同性質的層析技術不斷創建，應用十分廣泛，不僅在生物活性物質的分離、分析、純化、製備中不可或缺，臨床醫學中也可利用高效液相層析法檢測體液中含量極微、難以用一般化學方法分析的許多激素、維生素、代謝物、藥物和毒物等。
原理
按照待分離化合物與固定相／流動相的相互作用性質的不同，層析原理也各異。①吸附層析。待分離物質被固定相吸附，然後用流動相洗脫之，混合物中各成分洗脫次序的先後，決定於它在固定相中吸附的能力及在流動相中的溶解度。常用的固相吸附劑有氧化鋁、活性炭、澱粉、羥磷灰石等。洗脫液多用苯、石油醚等有機溶劑，或緩衝鹽溶液。②分配層析。待分離物質在兩種互不混溶的液相中進行分配，其中一種液相束縛於惰性支持物上，成為固定相;另一液相則為流動相。當流動相流經固定相時，易溶於流動相（不易溶於固定相）的物質乃先行洗脫。常用的能束縛液相的惰性支持物有濾紙、矽膠、纖維素等。③凝膠過濾層析。由交聯葡聚糖、瓊脂糖或聚丙烯醯胺凝膠等惰性介質，製成不同孔徑的微小顆粒，懸浮成膠。當待測物質流經層析柱時，分子小者可鑽入膠粒的小孔內，在流洗過程中，流洗出來較晚;而分子大者不能（或不易）進入膠粒的小孔內，將隨流洗液較早地被流洗出來。因此層析柱可起到分子篩的作用。④離子交換層析。解離基團結合在固定相中，在一定pH下帶一定的電荷（如陽電荷）；待分離化合物中在此pH下帶有相反的電荷者（如陰離子），即可與之相互吸引而滯留，然後可改變流洗液的pH或離子強度以洗脫之。待分離化合物中的陰離子能被吸引滯留者，稱陰離子交換層析，反之則為陽離子交換層析。新設計的聚焦層析，可按各蛋白質等電點的不同而一一分離之。⑤親和層析。利用抗原－抗體，酶與抑制物或配體與受體間的特異性的高度親和力，可以將一方（如抗體）結合於固定相中，用以分離相對應的另一方（如相應的特異抗原），然後通過改變流洗液的pH值及/或離子強度以解離特異性結合的物質（如抗原）。
種類
可按以下四個標準分類：①按待分離化合物與固定相/流動相的相互作用的性質區分，可分成吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析、疏水相互作用層析、共價層析及聚焦層析等。②按固定相與流動相狀態的不同，可分成固－液體系（如吸附層析）、液－液體系(如分配層析)及氣－液體系（即流動相為氣相的氣相層析）。③按流洗壓力的不同，可分成常壓、中壓及高壓液相層析。④按固相支持物填裝方式的不同，填裝成柱者稱柱層析(見圖)，平鋪在薄板上者稱薄層層析。
自從高效液相層析問世以來，層析技術獲得革命性的變化，不僅可在較短時間內，高效、精細地分析微量物質，還能快速分離純化較大規模的製備量。將高效液相層析與質譜聯用，氣相層析與質譜聯用(GC-MS)，或層析與電泳聯用，則效果更佳。
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