重組人生長激素
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重組人生長激素
拼音名:Chongzu Ren Shengzhangjisu
英文名:Recombinant Human Somatropin
書頁號:2000年版二部-494
本品是由191個胺基酸殘基或N端有一甲硫氨酸的192個胺基酸殘基組成的蛋白,可加適量賦形劑或
穩定劑。含重組人生長激素量應為標示量的90.0%~110.0%。
本品由DNA重組技術生產,必須在生產過程中,用體內生物測定方法測定其生物效價,每1mg蛋白效
價不得少於2.5單位。
重組人生長激素中殘餘宿主DNA和宿主細胞蛋白為與生產過程相關的、潛在的特異性雜質,必須在生
產過程中嚴格控制,其限度應符合有關規定。
目錄 |
性狀
本品為白色凍乾粉末。
鑒別
(1)取本品,加水製成每1ml中含2mg的溶液後,加入等體積的樣品緩衝液(取濃縮膠緩衝液
2.5ml、20%十二烷基硫酸鈉2.5ml、0.1%溴酚藍溶液1.0ml、87%甘油3.5ml,加水至10ml),再加β-巰基乙
醇至終濃度為5%,置水浴中3分鐘,放冷,作為供試品溶液;另取重組人生長激素對照品或甲醯化重組人生
長激素對照品,同法製備,作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品溶液各5μl,加至樣品孔,照電泳法(附錄
Ⅴ F 第五法,銀染色)試驗,供試品主成分遷移率應與相應的對照品遷移率一致。
(2)在相關蛋白質檢查項下記錄的色譜圖中,供試品主峰的保留時間應與相應的對照品(重組人生長激
素或甲醯化重組人生長激素對照品)的保留時間一致。
(3)取本品適量,用水製成每1ml中含2mg的溶液,取150μl,加三羥甲基氨基甲烷-醋酸緩衝液(取氯
化鈣0.294g、三羥甲基氨基甲烷12.11g,加水400ml使溶解,再用5mol/L醋酸溶液調節pH值至8.5,加
水至500ml)150μl、胰蛋白酶溶液[取經TPCK處理的胰蛋白酶適量,用1mol/L醋酸-醋酸鈉緩衝液
(pH5.0)製成每1ml中含1mg的溶液]10μl,混勻,置37℃水浴中4小時,加冰醋酸60μl終止反應,作為供試
品溶液;另取重組人生長激素或甲醯化重組人生長激素對照品適量,同法製備,作為對照品溶液。照高效液相
色譜法(附錄Ⅴ D)試驗,以辛基矽烷鍵合矽膠為填充劑(5~10μm);以0.1%三氟醋酸溶液為流動相A,
0.1%三氟醋酸的乙腈溶液為流動相B,進行梯度洗脫。流速為每分鐘1.0ml;柱溫為35℃;檢測波長
為214nm。
時間 流動相A 流動相B
0分 100% 0%
20分 80% 20%
45分 75% 25%
70分 50% 50%
75分 20% 80%
取對照品溶液和供試品溶液各100μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,供試品的肽圖譜應與對照品
的肽圖譜一致。
檢查
相關蛋白質 取本品適量,用0.05mol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液(pH7.5)製成每1ml
中含1mg的溶液,作為供試品溶液;另取重組人生長激素或甲醯化重組人生長激素對照品適量,同法製備,
作為對照品溶液。照高效液相色譜法(附錄Ⅴ D)測定,以丁基矽烷鍵合矽膠為填充劑(5~10μm);0.05mol/L
三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液(pH7.5)-正丙醇(約為71:29)為流動相,調節流動相中正丙醇比例使人生
長激素主峰保留時間為30~36分鐘;流速為每分鐘0.5ml;柱溫為45℃;檢測波長為220nm。取系統適用性
試驗用溶液[取重組人生長激素對照品或甲醯化重組人生長激素對照品,用上述三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩
沖液製成每1ml中含2mg的溶液,加過氧化氫溶液使終濃度為0.01%(ml/ml),在4℃放置5小時後,每
1ml加4.5mg的L-甲硫氨酸]20μl注入液相色譜儀,重組人生長激素主峰與氧化的重組人生長激素峰之間
的分離度應符合規定。取供試品溶液20μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按面積歸一化法計算,總相關蛋白
質含量不得過10.0%。
高分子蛋白質 取本品適量,照含量測定項下方法檢查,按面積歸一化法計算,高分子蛋白質含量不得
過4.0%。
無菌 取本品,依法檢查(附錄Ⅺ H 薄膜過濾法),應符合規定。
水分 取本品,照水分測定法(附錄Ⅷ M 第一法 A)測定,含水分不得過10.0%。
細菌內毒素 取本品,依法檢查(附錄Ⅺ E),每1mg重組人生長激素中含內毒素的量應小於5EU。
含量測定
照高效液相色譜法(附錄Ⅴ D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗 以適合分離分子量為5000~60000球狀蛋白的色譜用親水矽膠為填充
劑;以0.395%碳酸氫銨溶液為流動相;流速為每分鐘0.6ml;檢測波長為214nm。取系統適用性試驗用溶液
(取人生長激素單體-二聚體對照品,用流動相製成每1ml中含1.5mg的溶液)20μl注入液相色譜儀,以人生
長激素單體和二聚體之間的峰谷高與二聚體的峰高之比作為分離度,分離度應不大於0.6。
測定法 取本品,加流動相製成每1ml中含1.0mg的溶液,取20μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取
重組人生長激素對照品適量,同法則定。按外標法以峰面積計算。
類別
生長激素類藥。
貯藏
密閉,2~8℃保存。
製劑
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