醫學微生物學/厭氧菌的檢驗

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醫學微生物學

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一、標本採集

許多無牙胞厭氧菌是人體的正常菌群,在採集標本時盡量避免正常菌群的污染。應該採取沒有正常菌群污染的標本。標本採取後應迅速送檢,立即接種,放入厭氧環境中培養,盡量減少空氣接觸,以免厭氧菌死亡。

二、塗片鏡檢

膿液標本可直接塗片染色後觀察細菌形態特徵、染色性、菌數多少等供選擇培養基和判定結果時參考。

三、接種培養

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養厭氧菌,必須創造一個無氧的環境。通常用培養基中加入還原劑,或用物理化學方法去除環境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基,牛心腦浸液培養基等。常用的厭氧培養方法有許多,可根據實際情況選用。

1.厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養基試管,可放入厭氧缸內培養,厭氧缸是普通的乾燥缸,用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境,從而將厭氧菌培養出來。

2.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內裝氣體發生管(有硼氫化鈉碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、乾燥劑。放入已接種好的平板後,盡量擠出袋內空氣,然後密封袋口。先折斷氣體發生管,後折斷美蘭指示劑管,命名袋內在半小時內造成無氣環境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態,可以孵育。

3.厭氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今為止國際上公認的培養厭氧菌最佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作,故名。箱側有一交換室,具有內外二門,內門通箱內先關著。欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關上外門進行抽氣和換氣(H2,CO2,N2)達到厭氧狀態,然後手伸入手套把交換室內門打開,將物品移入箱內,關上內門。箱內保持厭氧狀態,也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘餘氧化合成水的原理。該箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便於觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適於作厭氧細菌的大量培養研究,大量培養基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均系自動調節。

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