臨床生物化學/方法建立的原理確定

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臨床生化方法按其傳統分類可分為光譜法、層析法電泳法、酶法、電化學法、分子生物學免疫化學法等,這些方法的建立首先要根據其技術的原理(詳見前面有關章節)和被測物質的物理化學性質來確定其方法建立的原理,例如亮度法測定的對象是各種有色物質,有色物質溶液的顏色深淺與其濃度有一定的關係,濃度大時色深,濃度小時色淺,比較顏色的深淺即可測知待測物質的濃度。為此,首先要知道待測物質本身是否有色,若本身無色,能與何種物質在什麼條件下呈色,弄清後即可與一已知濃度的標準品作比較,然後分別測出兩者的吸亮度,從郎伯-比耳定律可得知:

Goqpa0zd.jpg


由於分析的物質相同,處理也一樣,故K值相同,再因為測定時用同樣比色皿(L1=L2),所以光度法中測得未知液與標準液吸光度的比值就等於其濃度的比值。(A1/A2=C1/C2)。如C1為未知物濃度,則可得到計算公式如下:

C1=A1×C2/A2

只要再乘以測定時標本的稀釋倍數,即為通常光度法測定的通用的計算公式,但此公式只有在測定時空白管為零的條件下才適用。

32 臨床生化方法的建立 | 方法建立時的條件選擇 32
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