熒光分光光度計
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熒光分光光度計是用於掃描液相熒游標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關係。熒光分光光度計的激發波長掃描範圍一般是190~650nm，發射波長掃描範圍是200~800nm。可用於液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形範圍寬等優點，可以廣泛應用於生命科學、醫學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。
目錄 |
基本結構與原理
由高壓汞燈或氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中，激發樣品中的熒光物質發出熒光，熒光經過濾過和反射後，被光電倍增管所接受，然後以圖或數字的形式顯示出來。
基本結構和原理如圖所示，光源與檢測器成直角方式安排。
熒光分光光度計的工作原理：
物質熒光的產生是由在通常狀況下處於基態的物質分子吸收激發光後變為激發態, 這些處於激發態的分子是不穩定的,在返回基態的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產生熒光．
不同物質由於分子結構的不同,其激發態能級的分布具有各自不同的特徵，這種特徵反映在熒光上表現為各種物質都有其特徵熒光激發和發射光譜；，因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。
在溶液中，當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關係,即IF=KC,利用這種關係可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也採用標準曲線法進行。
熒光分光光度計基本結構和原理圖
1. 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，後者能發射出強度較大的連續光譜，且在300nm～400nm 範圍內強度幾乎相等，故較常用。
2．激發單色器：
置於光源和樣品室之間的為激發單色器或第一單色器，篩選出特定的激發光譜。
3．發射單色器：
置於樣品室和檢測器之間的為發射單色器或第二單色器，常採用光柵為單色器。篩選出特定的發射光譜。
4． 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。
5． 檢測器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大並轉為電信號。
功能特點
1． 熒光發射光譜
選擇某一固定波長的光激發樣品，記錄樣品中產生的熒光發射強度與發射波長間的函數關係，即得熒光發射光譜。
2． 熒光激發光譜
選定某一熒光發射波長記錄熒光發射強度作為激發光波長的函數，即得熒光激發光譜。
3．時間分辨技術；
可用於對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進行分辨並分別測量。
時間分辨熒光測定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數函數
P0：強度取值
EXP：指數運算符
t：時間取值
τ：熒光平均時間壽命
應用：
對經光源激發後產生熒光的物質或經化學處理後產生熒光的物質成份分析，可應用於生物化學、生物醫學、環境化工等部門。
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