高效液相色譜法
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高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)又稱高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜、近代柱色譜等,是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,採用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩衝液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離後,進入檢測器進行檢測,從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。
高效液相色譜是目前應用最多的色譜分析方法,高效液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似於氣相色譜,但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。高效液相色譜法的輸液泵要求輸液量恆定平穩;進樣系統要求進樣便利切換嚴密;由於液體流動相粘度遠遠高於氣體,為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長度也遠小於氣相色譜柱。
高效液相色譜法的特點
高效液相色譜法有「三高一廣一快」的特點:
- 高壓:流動相為液體,流經色譜柱時,受到的阻力較大,為了能迅速通過色譜柱,必須對載液加高壓。
- 高效:分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果,比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
- 高靈敏度:紫外檢測器可達0.01ng,進樣量在uL數量級。
- 應用範圍廣:百分以上的有機化合物可用高效液相色譜分析,特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析,顯示出優勢。
- 分析速度快、載液流速快:較經典液體色譜法速度快得多,通常分析一個樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內即可完成,一般小於1小時。
此外高效液相色譜還有色譜柱可反覆使用、樣品不被破壞、易回收等優點,但也有缺點,與氣相色譜相比各有所長,相互補充。高效液相色譜的缺點是有「柱外效應」。在從進樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間(進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中,如果流動相的流型有變化,被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬,柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
高效液相色譜儀
高效液相色譜儀的結構和流程多種多樣。 高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置(用雙泵)、進樣器、色譜柱、檢測器、恆溫器、記錄儀等主要部件。
出自A+醫學百科 「高效液相色譜法」條目 http://cht.a-hospital.com/w/%E9%AB%98%E6%95%88%E6%B6%B2%E7%9B%B8%E8%89%B2%E8%B0%B1%E6%B3%95 轉載請保留此連結
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